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目的:本文旨在通过检测T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3(T-cell immunoglobulin and mucin domain-containing protein 3,Tim-3)在结肠癌患者外周血及癌组织中yδT细胞表面的表达变化,初步分析其与结肠癌患者临床病理特征之间的关系。进一步研究Tim-3对γδT细胞的增殖、凋亡、分化、细胞因子分泌以及对结肠癌细胞毒性的影响,并初步探讨γδT细胞对结肠癌细胞毒性可能的作用机制。方法:1.收集44例结肠癌患者外周血和10例结肠癌患者术后新鲜癌组织,流式细胞术检测结肠癌患者外周血及癌组织中γδT细胞表面Tim-3的表达,并初步分析结肠癌患者外周血γδT细胞表面Tim-3的表达与患者临床病理特征之间的关系;2.使用Tim-3激动性配体Galectin-9刺激γδT细胞后,采用流式细胞术检测γδT细胞增殖、凋亡、细胞因子(IL-4、IL-17、IFN-y)分泌及分化(IL4+yδT、IL-17+yδT、IFN-γ+yδT),同时 Western blot 检测 yδT 细胞凋亡相关蛋白(Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9)的表达;3.使用Tim-3激动性配体Galectin-9刺激γδT细胞后,采用CCK-8实验检测γδT细胞对结肠癌细胞毒性;通过ELISA实验检测Tim-3活化对γδT细胞产生颗粒酶B和穿孔素的影响;采用Western blot实验检测Tim-3活化对γδT细胞内相关信号通路蛋白表达的影响。结果:1.Tim-3在结肠癌患者外周血yδT细胞表面表达的百分比为21.17(7.76,31.83)%高于健康志愿者11.65(6.25,14.70)%,差异具有统计学意义(P<0.05)。Tim-3在结肠癌组织γδT细胞表面表达百分比为(14.68±2.67)%高于相应的癌旁组织(6.56±1.64)%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结合临床病理资料分析,Tim-3在结肠癌患者外周血γδT细胞表面表达与患者年龄、性别、肿瘤部位和有无远处转移无关(P>0.05),而与肿瘤TNM分期及体积明显相关(P<0.05);2.使用Tim-3激动性配体Galectin-9刺激γδT细胞后,Tim-3信号激活可显著抑制γδT细胞增殖,促进其凋亡,促进IL-17分泌和IL17+yδT细胞分化(P<0.05)。Western blot实验结果显示,Tim-3信号激活可明显促进y8T细胞Caspase-9、Caspase-3的表达,而抑制Bcl-2的表达(P<0.05);3.CCK-8和ELISA实验结果显示,Tim-3信号激活可显著抑制γδT细胞对结肠癌细胞毒性和颗粒酶B、穿孔素的表达(P<0.05)。Western blot实验结果显示,Tim-3信号激活可抑制γδT细胞中P-ERK1/2与P-JNK的表达(P<0.05),其中P-ERK1/2更明显被抑制;当抑制γδT细胞中ERK1/2信号通路后,其对结肠癌细胞毒性和颗粒酶B、穿孔素的表达明显被抑制(P<0.05)。结论:1.γδT细胞表面表达的Tim-3可能在结肠癌演变过程中发挥重要作用,可能参与结肠癌细胞的免疫逃逸。2.Tim-3可能是通过调控γδT细胞中ERK1/2信号通路介导的颗粒酶B与穿孔素释放,从而抑制了γδT细胞对结肠癌细胞毒性并促使肿瘤细胞发生免疫逃逸。因此,Tim-3有望成为结肠癌患者治疗的新靶点。