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1.目的:
葛根是一种传统中药,常用于治疗酒精中毒诱发的相关疾病,包括酒精性肝病(ALD),但其作用机制未被充分阐明。由于酒精诱导的小肠通透性增加在ALD的发病过程中起着至关重要的作用,本研究旨在考察葛根总黄酮对ALD的防治作用,以及该作用是否涉及到对大鼠小肠通透性的影响。
2.内容:
实验1.葛根总黄酮的提取分离和含量测定。
实验2.葛根总黄酮对大鼠酒精性肝损伤的作用。
实验3.葛根总黄酮对酒精引起的的大鼠小肠通透性增加的影响。
3.方法:
实验1.考察葛根总黄酮的提取分离和含量测定干燥葛根经70%乙醇粗提,再经D101型大孔树脂纯化后得葛根总黄酮。总黄酮和各主要单体成分含量分别由紫外分光光度法和高效液相分析测得。
实验2.评价葛根总黄酮对大鼠酒精性肝损伤的作用Wistar 雄性大鼠灌胃酒精或同时给予葛根总黄酮8周,酒精剂量由1ml/kg/d逐渐增加到2ml/kg/d。通过血液酒精水平(BAL),血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的测定结合肝脏形态学分析来考察葛根总黄酮对酒精性肝损伤的作用。
实验3.评价葛根总黄酮对酒精引起的大鼠小肠通透性增加的影响应用同样的动物模型,通过小肠通透性的测定,结合小肠形态学和免疫组化来考察葛根总黄酮对酒精引起的小肠通透性增加的影响。
4.结果:
实验1.100g葛根原药材经提取分离后可得3.89g葛根总黄酮。紫外分光光度计测得其总黄酮含量为80.39%,高效液相测得其葛根素、大豆苷和大豆苷元的含量分别为58.93%,11.16%,4.91%。
实验2.慢性酒精中毒造成了BAL的升高,血清ALT、AST水平的上升,SOD活性的降低和MDA水平的升高。此外,酒精造成了肝脏形态学的损害,包括脂变、炎症和坏死。葛根总黄酮可以抑制BAL的升高,提示其有影响酒精吸收的作用。另外,葛根总黄酮可以减轻酒精引起的肝脏形态学损害,对抗酒精造成的血清ALT、AST、SOD和MDA水平的改变。
实验3.慢性酒精中毒导致了小肠通透性的增加和小肠粘膜的轻微损伤。此外,小肠紧密连接蛋白ZO-1几乎被完全破坏。葛根总黄酮可以抑制酒精引起的小肠通透性的增加,减轻酒精对小肠粘膜上皮以及上皮细胞间紧密连接蛋白ZO-1的损害。
5.结论:
(1)葛根总黄酮能防治慢性酒精中毒引起的大鼠肝脏损害。
(2)葛根总黄酮能抑制酒精引起的大鼠小肠通透性的增加。
(3)葛根总黄酮通过保护小肠粘膜上皮,作用上皮细胞间紧密连接蛋白ZO-1来维护小肠的屏障功能。
(4)葛根总黄酮降低慢性酒精摄入所致的肝肠损害可能与其影响酒精吸收,抗氧化作用有关。