【摘 要】
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宽体金线蛭在我国分布广,产量大,具有治疗动脉硬化、中分偏瘫、破血通经、抗血栓、抗凝血等作用。通过酶解可进一步提高其生物学活性,且极易被人体吸收。本论文以宽体金线蛭
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宽体金线蛭在我国分布广,产量大,具有治疗动脉硬化、中分偏瘫、破血通经、抗血栓、抗凝血等作用。通过酶解可进一步提高其生物学活性,且极易被人体吸收。本论文以宽体金线蛭为原料通过酶法制备抗凝血活性肽,并进行产品开发,以提高其附加值。主要研究内容及结果如下。宽体金线蛭的基本成分测定结果表明,其蛋白质含量为65.46%,脂肪5.59%,灰分 7.75%,水分 5.76%。以抗凝血活性为指标,对水解宽体金线蛭的蛋白酶进行了筛选,研究关键因素对水解宽体金线蛭水解物抗凝血活性的影响规律,并进行技术参数优化,结果表明,酶解宽体金线蛭的最适蛋白酶为胰蛋白酶,底物浓度10%能保证酶解反应高效进行,随着酶解温度、pH、酶添加量的增加,酶解液抗凝血活性呈现先增加后减小的趋势,随着时间的增加,酶解液抗凝血活性先增大后趋近平缓。四个因素对酶解反应的抗凝血活性的影响程度大小顺序为加酶量>温度>pH值>时间。对抗凝血活性的显著性影响因素为加酶量、温度、pH和时间。优化实验结果表明,胰蛋白酶水解宽体金线蛭的适宜条件为:反应pH为8.5,酶解温度是55℃,加酶量6000U/g,酶解3h,在此条件下酶解得到的酶解液的抗凝血活性为304U/g,水解度为18.34%。宽体金线蛭酶解液经分子量5kDa和10kDa的中空纤维滤膜后,得到三个组分,小于5kDa的部分抗凝血活性最强。小于5kDa的部分再经葡聚糖凝胶G-15凝胶层析后,得到P1、P2、P3、P4、P5这五个组分,检测结果表明,P4部分的抗凝血活性最高可达640U/g,经质谱仪分析知,P4部分分子量为568.817Da。研究了多肽口服液产品的加工工艺,结果表明,白砂糖9%、β-环状糊精2%、柠檬酸0.15%时,产品的口感最好;产品的灭菌条件为121℃灭菌10min。最后对宽体金线蛭多肽口服液的质量指标进行测定,结果表明各项指标均达到要求。
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