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基因工程菌毕赤酵母表达重组人复合α干扰素(clFN)的过程中会发生聚合、降解等现象。本文在5L发酵罐上,对clFN表达的降解现象进行了分析和研究。
为研究蛋白酶对降解的影响,建立了紫外光谱法测发酵液胞外蛋白酶活力的方法。使用此方法研究了不同诱导温度下的蛋白酶活力,发现30℃诱导的发酵液后期蛋白酶活远高于低温诱导。流式细胞仪检测不同诱导温度下的细胞活性,发现高诱导温度使细胞死亡率上升,裂解出更多蛋白酶,造成cIFN降解现象严重。
研究了不同诱导pH对cIFN降解的影响。发现pH4.0-5.0诱导的cIFN表达最好,生物活性达2.5×10<8>IU/mL。结合胞外蛋白酶活测定和基于流式细胞仪检测的细胞活性分析,发现不同诱导pH下的降解也与胞外蛋白酶活有相关性。低诱导pH下,细胞死亡率升高释放更多酶系;高诱导pH下,蛋白酶活性明显增大,两者都使蛋白酶作用加强,pH7.0诱导更是将clFN完全降解。从诱导pH,添加Tween-20及使用复合培养基可以同时影响聚合与降解两种现象推断,目的蛋白构象的稳定性可能也是影响降解发生的重要因素之一。