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目的:通过观察三七总皂苷对大鼠大脑中动脉脑缺血/再灌注(MCA-CI/RP)损伤后神经功能、脑梗死体积、神经细胞凋亡及脑源性神经营养因子(brain-derivedneurotrophicfactor,BDNF)表达等方面的影响,探讨三七总皂苷的神经保护作用及其机制。
方法:参考Longa线栓法并加以改良建立大鼠MCA-CI/RP动物模型。将90只清洁级健康成年雄性SD大鼠按随机数字表随机分成5组,假手术组(A组)、缺血再灌注组(B组)、血栓通注射液低剂量组(C组)及血栓通注射液高剂量组(D组),川芎嗪注射液治疗对照组(E组),每组18只,各组大鼠于术前半小时及术后六小时各给药1次。各组于CI/RP24h进行神经功能评分后断头取脑,应用TTC染色法测定脑梗死体积,TUNEL技术原位标记凋亡细胞,免疫组化法检测BDNF的表达。
结果:大鼠MCA-CI/RP24h后,B、C、D、E各组均出现不同程度的白色梗死灶,主要位于额顶叶皮层、海马区,尾状核、苍白区、内囊后肢、部分下丘脑和丘脑等,与MCA支配的脑区域一致。A、B、C、D、E各组梗死体积率(%)分别为0,24.23±1.36,21.52±1.66,15.41±1.66,15.20±1.66;C、D、E各组与对照组B组相比较,均能显著缩小缺血再灌注后脑组织梗死体积,差异有统计学意义(P<0.05);与C组比较,D组脑梗死体积率更小,差异均有统计学意义(P<0.05),D组与E组比较差异无统计学意义(P>0.05)。
在神经功能评分方面,各组Longa评分(分)分别为0,2.28±0.69,2.01±0.73,1.33±0.48,1.43±0.59。与B组比较,C、D、E各组评分均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与C组比较,D组Longa评分更低,差异均有统计学意义(P<0.05)。D组与E组比较差异有统计学意义(P<0.05),但是Longa评分相当,在临床意义上无明显差别。
MCA-CI/RP后,各组大鼠缺血侧的脑组织可见较多阳性表达的凋亡细胞,主要分布区域为梗死病灶的周边区,各组凋亡率(%)分别为4.68±1.30,63.34±1.25,50.51±1.25,34.62±2.16,36.29±3.89。与A组比较,B、C、D、E各组凋亡率出现不同程度升高的,差异有统计学意义(P<0.05)。与B组比较,C、D、E各组凋亡率出现明显的降低,差异有统计学意义(P<0.05)。D组与E组比较,差异无统计学意义(P>0.05),与C组比较,D凋亡率下降明显,差异有统计学意义(P<0.05)。
研究发现,各实验组均可见不同程度BDNF阳性细胞表达,其阳性表达数(个)分别为6.51±1.25,20.32±1.66,28.53±2.33,39.75±2.86,40.25±1.04。A组鼠脑内仅有微弱的BDNF表达;B组与A组比较,差异有统计学意义(P<0.05);施加药物后,C、D、E各组的BDNF阳性表达数较B组明显升高,差异有统计学意义(P均<0.05)。D组与E组比较,BDNF的阳性表达数差异无统计学意义(P>0.05);与C组比较,D组BDNF的阳性表达数升高更明显,差异有统计学意义(P<0.05)。
结论:1.采用线栓法成功复制出大鼠MCA-CI/RP模型,缺血后大鼠出现TTC染色阳性梗死脑组织、神经功能缺损及神经细胞凋亡率增加;2.三七总皂苷可以缩小MCA-CI/RP大鼠脑梗死体积以及神经细胞的凋亡,梗死后神经功能缺损程度,促进神经功能恢复;3.三七总皂苷的神经保护作用可能是通过增加缺血脑组织内源性BDNF的表达来实现;4.三七总皂苷的保护作用可能具有量效关系,大剂量组三七总皂苷作用优于小剂量组。