【目的】流感每年给人类的健康和经济造成巨大损害,而接种流感疫苗是预防流感行之有效的方法。在短期内快速高效的生产疫苗,对生产制造商来说是一个挑战。因此,需要一套经济高效的流感疫苗生产工艺来支撑庞大的疫苗需求。传统流感疫苗主要借助于鸡胚生产,具有多种局限性,例如鸡胚供应可能受到流感大流行的影响。细胞基质流感疫苗逐渐成为近些年的研发热点,国外已有部分企业上市了此种疫苗。本研究通过对比不同的细胞基质流感疫苗的纯化工艺以及对纯化工艺进行优化,进而获得纯度较高的细胞基质疫苗原液。【方法】BV69流感病毒经过深层过滤、核酸酶处理和超滤后,经过一步层析,对Sepharose 4FF、Capto core 700以及Cellufine sulfate的纯化条件进行优化,对收获的病毒液进行灭活以及灭活验证,将灭活后的病毒液进行二步层析,包括Capto Q和Q Sepharose xl的纯化条件优化。鉴于考虑实际生产的成本和效率问题,在保证病毒回收率的前提下,最终初步选择Capto core 700和Capto Q相结合的两步层析法作为BV69、H1N1、BY、H3N2的纯化选择。【结果】以BY病毒的纯化为例,经过Capto core 700和Capto Q两步层析后,最终病毒回收率为61.5%,血凝素含量为45.4μg/mL,总蛋白去除率为79.3%,总蛋白为72.8μg/mL,DNA去除率为99.3%,DNA含量为20pg/mL。以上指标均达到了药典要求。为流感疫苗的大规模生产奠定了基础。【讨论】通过一系列纯化工艺的摸索,去除了病毒原液中的杂蛋白和宿主DNA等,最终原液各项相关指标均达到拟定要求。该课题建立的针对MDCK细胞基质流感疫苗纯化工艺条件在细胞基质流感疫苗的大规模生产中具有重要作用。