【摘 要】
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禽戊型肝炎(HEV)是由禽戊型肝炎病毒(Avian Hepatitis E Virus)感染所致的病毒肝炎,主要经肠道传播,临床症状表现为为肝脾肿大,肝坏死,肝出血,卵巢退化,死亡率上升及产蛋率下
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禽戊型肝炎(HEV)是由禽戊型肝炎病毒(Avian Hepatitis E Virus)感染所致的病毒肝炎,主要经肠道传播,临床症状表现为为肝脾肿大,肝坏死,肝出血,卵巢退化,死亡率上升及产蛋率下降等。2001年,Haqshenas等从患有肝脾肿大(hepatitis-splenomegaly, HS)综合症的鸡胆汁中首次分离出禽HEV。自禽HEV发现以来,对禽HEV血清流行病学的调查已有了数篇的报道,但由于禽HEV和人、猪HEV ORF2抗体的交叉反应,使得血清学的调查一直处于初级阶段。禽HEV ORF2基因序列同人、猪HEV的同源性为48-49%,其中ORF2蛋白中最保守的区域位于aa339-606。将本实验室保存的禽HEV ORF2-1重组质粒转入大肠杆菌原核表达禽HEV ORF2-1蛋白(aa339-564),经过提纯后免疫小鼠,经常规的细胞融合和亚克隆制备出6株禽HEV ORF2-1蛋白的单克隆抗体(7H12, 3E8, 1B5, 1H5, 3A1和6G8)。利用9段ORF2截短的蛋白(ORF2-1~9)和8个多肽,通过间接ELISA方法,确定6株单抗7H12, 3E8, 1B5, 1H5, 3A1和6G8分别识别aa339-355, aa355-384, aa355-384, aa384-414, aa389-398和aa510-516。3E8和1B5两株单抗识别同一抗原表位区aa355-383,但这一抗原表位区含有28aa,为了区别3E8和1B5,将3E8用HRP标记后做竞争ELISA,竞争ELISA结果显示3E8和1B5两株单抗识别两个不相互重叠的抗原表位。2009年,赵钦等从中国患有大肝大脾的鸡胆汁中首次分离出禽HEV,将中国株禽HEV攻毒SPF鸡,采集攻毒后粪便、血清等。利用6株单抗采用免疫捕获病毒方法去捕获攻毒后粪便中的禽HEV,其中7H12和1H5两株单抗可以捕获到病毒,进一步通过免疫组化实验证明7H12和1H5可以检测到攻毒鸡的器官中有禽HEV ORF2蛋白的存在。本实验制备出的6株单克隆抗体为研究禽、人和猪HEVs血清学调查提供了良好的物质基础。同时,7H12和1H5两株单抗可以捕获禽HEV病毒为禽HEV的确诊提供了理论依据。
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