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帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是一种常见的中老年中枢神经系统退行性疾病,随着人口的老龄化,PD已成为威胁人类健康的主要疾病之一。PD主要病理变化是黑质致密部多巴胺神经元(dopaminergic neuron)脱失,导致了患者出现运动减少、僵直、震颤等临床症状。由于PD的发病原因至今不十分清楚,因此也无理想的防治措施。神经保护性治疗已成为当前PD研究的热点之一。现代药理证明天麻及其制剂具有调节免疫、抗炎、抗凋亡等功效,对神经细胞具有保护作用。本研究使用高效液相、免疫组织化学等技术研究探讨了天麻对PD大鼠行为学、形态学、与PD有关的神经递质、细胞凋亡等因素的影响,将有助于揭示PD的发病机理及天麻防治PD的作用机制,为临床用药提供理论依据,具有重要的理论意义和实用价值。实验选用SD大鼠60只,应用6-OHDA复制PD模型50只。动物随机分为六组:①正常对照组;②模型对照组;③西药对照组(美多巴组);④天麻大剂量组(简称大剂量组);⑤天麻中剂量组(简称中剂量组);⑥天麻小剂量组(简称小剂量组)。动物的存活期为14天。实验分为四个部分:①天麻对PD鼠行为学、病理学变化的影响;②天麻对PD大鼠纹状体DA及其代谢产物含量的影响;③应用免疫组化技术观察PD鼠黑质(substantia nigra,SN)与腹侧被盖区(the ventral tegmental area,VTA)肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和胶质源神经营养因子(Glial cell line-derived neurotrophic growth factor,GDFN)的表达影响;④应用免疫组化技术观察PD鼠SN、VTA区酪氨羟化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)和Caspase-3的表达。主要结果如下:1天麻对PD大鼠行为学和形体学的影响旋转实验:各组大鼠注射阿朴吗啡(apomorphine,APO)后10Min.都出现不同程度的兴奋状态:躁动,觅食等。大鼠旋转实验结果显示:天麻可改善PD大鼠的行为异常,其中天麻小剂量组和美多巴组与模型组比较有显著性差异(p<0.05),大、中剂量组与模型组比较无统计学意义。Morris水迷宫实验:定位航行试验的结果显示小剂量组与模型组比较有统计学意义(p<0.05)。HE染色结果:天麻各剂量组大鼠SN区神经元的形态基本相似,数量未见明显减少,仅见少数神经元变性。2天麻对PD大鼠纹状体DA及其代谢产物含量的影响高压液相色谱(法)检测结果统计显示:模型组DA、DOPAC和HVA均较正常组显著降低(p<0.01)。DOPAC/DA与HVADA/比值与正常组比较都不同程度地升高。其中小剂量组的DA、DOPAC和HVA的含量与模型组比较有显著升高(p<0.05),接近正常组和美多巴组;大、中剂量组的DA及其代谢产物提高不明显没有统计学意义。3天麻对PD鼠脑内胶质细胞TNF-α、GDNF表达的影响TNF-α图像分析及统计结果显示:①模型组VTA、SN区DA能神经元胞质TNF-α表达量较正常组显著升高(p<0.01);小剂量组、美多巴组VTA和SN与正常组比较差异均不显著(p>0.05),与模型组比较TNF-α表达明显降低且差异显著(p<0.05);小剂量组与美多巴组相比差异不显著(p>0.05)。各组右侧(未损伤侧)SN和VTA间比较差异均不显著(p>0.05)。GDNF图像分析及统计结果显示:①与模型组比较,中、小剂量组VTA、SN区DA能神经元胞质GDNF表达量显著升高(p<0.05);②与正常组相比小剂量组VTA、SN区GDNF表达升高差异显著(p<0.05);③与美多巴组比较小剂量组VTA的GDNF表达亦升高(p<0.05)。4天麻对PD鼠黑质Caspase-3表达及TH阳性神经元的影响实验研究表明:与正常组比较模型组PD大鼠中脑黑质致密部酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元的数目减少了约45%;各天麻治疗组可部分减少黑质致密部TH阳性神经元的丢失,其丢失程度较模型组明显减低,其中小剂量组和中剂量组,减少约16%和17%,效果较好;大剂量和美多巴组,减少约22%和20%。相应的小剂量和中级量组的Caspase-3阳性神经元表达较模型组明显减少。各组Caspase-3阳性神经元的表达与TH阳性神经元的表达呈相反趋势。结论:①免疫炎症和细胞凋亡可能是PD大鼠中脑多巴胺神经元丢失的主要方式。②天麻可通过调节上述因素减少细胞凋亡,其中天麻小剂量组有较好的作用。提示天麻可不同程度地保护多巴胺神经元,减缓PD病程的进展