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不同来源的木聚糖酶具有不同的酶学特性,其中部分特性是互补的;具有差异互补性的不同来源木聚糖酶在进行科学组合之后,能达到水解底物“组合增效”的作用。本论文在分析不同来源木聚糖酶的理化特性基础上,以“差异互补、协同增效”为理念,设计并筛选组合型木聚糖酶;筛选成功以后,进行肉鸡饲养试验研究其对生产性能的影响;最后,通过对器官指数和内源消化酶的分析、肠道葡萄糖和氨基酸转运载体mRNA的表达丰度,来探讨组合型木聚糖酶影响肉鸡生产性能的作用机理。试验一:不同来源木聚糖酶的理化特性
选取pH值(2.0~9.0)、胃蛋白酶(200U/mL)和胰蛋白酶(200U/mL)为处理因子,研究了7种不同来源的木聚糖酶的理化特性,酶活测定方法采取还原糖法。结果表明,在pH值2.0~2.5条件下,木聚糖酶A的残余活力为19.41%~26.56%,而酶B、C、D、E、F、G的活力则完全丧失;经胃蛋白酶处理以后,酶D和酶F相对酶活力分别为158.98%和162.66%;酶A和酶G相对活力分别为98.47%和103.00%,而酶B、酶C和酶E相对酶活则为20.59%、51.99%和48.02%;经过胰蛋白酶处理以后,酶A相对酶活为79.2%,酶B、C、D、E、F和G相对酶活分别为111.2%、209.0%、145.2%、176.7%、133.6%和115%;经过胃-蛋白酶处理以后,酶A、B、C和E的相对活力分别为62.8%、15.5%、80%和64.1%,酶D、F和G为162.6%、118.4%和101.00%;木聚糖酶A与酶D、F和G酶学特性具有差异互补性。试验二:组合型木聚糖酶的筛选
以桦木木聚糖作为底物,木聚糖酶A与D、木聚糖酶A与F和木聚糖酶A与G均按照1:9、2:8、3:7、4:6、5:5、6:4、7:3、8:2和9:1的比例进行组合,通过检测还原糖的生成量,筛选组合酶在桦木木聚糖中的最佳组合比例;以小麦为底物,木聚糖酶A与F按照1:9、2:8、3:7、4:6、5:5、6:4、7:3、8:2和9:1的比例进行组合,酶A与酶G则按照1:13、2:11、2:8、3:7、4:6、5:5、6:4、7:3和11:2的比例进行组合,通过检测淀粉消化率和干物质消化率,筛选出组合酶在小麦型日粮中的最佳添加比例。结果表明,以桦木木聚糖作为底物时,酶A与酶D,酶A与酶F,酶A与酶G的组合比例分别为2:8、4:6和6:4时,还原糖产生量最大;当以小麦为底物时,组合酶的组合比例为4:6和5:5时,淀粉消化率和干物质消化率值最高。
试验三:组合型木聚糖酶对黄羽肉鸡生长性能及养分利用率的影响
2880只黄羽肉鸡公鸡按照体重、体况基本一致的原则,进行饲养试验,随机分成8个处理;每个处理组6个重复,每个重复60只鸡。正对照组小鸡、中鸡、大鸡日粮代谢能和粗蛋白水平分别为2935kcal/kg和21.0%、2994kcal/kg和18.5%、3150kcal/kg和17%,负对照组小鸡、中鸡和大鸡日粮代谢能和粗蛋白水平分别在正对照组的基础上降低145kcal/kg和1%、144kcal/kg和0.5%、200kcal/kg和0.5%;加酶处理组分别在负对照组日粮基础上添加4000U/kg的单酶A、D、G,组合型木聚糖A+D(4:6)、A+G(1:1)和D+G(1:1)。通过体外消化试验,研究单酶(A、D、G)和组合酶(A+D、A+G、D+G)对小鸡料淀粉消化率和干物质消化率进行研究,酶的添加剂量均为4000U/kg。结果表明,在小鸡阶段,组合酶组(A+D、A+G、D+G)和单酶G均显著提高了雏鸡的平均日采食量和平均日增重(P<0.05),提高幅度分别为5.53%、4.60%、3.69%、4.15%和7.84%、7.84%、4.90%、4.90%,另外组合酶A+D显著提高了雏鸡的料重比(P<0.05),提高幅度为2.83%。木聚糖酶(A、D、G、A+D、A+G、D+G)添加后,淀粉消化率分别提高7.49%、4.56%、3.64%、6.32%、6.07%和3.26%,干物质消化率的分别提高5.57%、2.92%、2.59%、6.33%、3.22%和4.44%。试验四:组合型木聚糖酶对黄羽肉鸡内脏器官指数和内源消化酶活力的影响
实验三饲养试验结束后,在21日龄、42日龄和63日龄,每个重复取接近平均体重的黄羽肉鸡2只,称重并屠宰;测量心脏、肝脏、脾脏、胰腺、腺胃、肌胃、十二指肠、空肠和回肠的器官指数以及肌胃食糜胃蛋白酶和胰腺胰淀粉酶、胰脂肪酶和胰蛋白酶的酶活。结果表明,在小麦型日粮中添加酶制剂,降低了肝脏、肌胃、腺胃的器官指数,但是与负对照组差异不显著(P>0.05);木聚糖酶的添加,降低了小鸡阶段胃蛋白酶和胰蛋白酶的分泌水平,增加了胰淀粉酶的分泌水平;降低了中鸡阶段胰淀粉酶和胰蛋白酶的分泌水平,增加了胃蛋白酶和胰脂肪酶的分泌水平;增加了大鸡阶段胃蛋白酶和胰脂肪酶的分泌水平;但是差异均不显著(P>0.05)。试验五:组合型木聚糖酶对21日龄黄羽肉鸡葡萄糖和氨基酸转运载体空肠mRNA表达丰度的影响。
选取21日龄接近平均体重的黄羽肉鸡,采集空肠粘膜样品,应用RT-Real-time PCR对葡萄糖转运载体SGLT1和GLUT2和氨基酸转运载体γBAT和y+LAT2在空肠的表达丰度进行测定。结果表明,小麦替代玉米作为能量饲料,显著降低了氨基酸转运载体y+LAT2 mRNA在空肠的表达丰度(P<0.05),组合酶A+D显著增加了(P<0.05)葡萄糖转运载体SGLT1和GLUT2和氨基酸转运载体y+LAT2 mRNA在空肠的表达水平,单酶A则显著增加了(P<0.05)氨基酸转运载体γBAT mRNA在空肠的表达丰度。