内蒙传统发酵奶油制品中CLA产生菌的筛选及发酵条件优化

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 6次 | 上传用户:qq330525312
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本论文从传统发酵奶油制品中分离筛选出生产共轭亚油酸(Conjugated Linoleic Acid; CLA)产量较高的菌株,利用气相色谱法(Gas Chromatography; GC)分析发酵液中CLA异构体的组成情况,并对筛选所得菌株的培养基和发酵条件进行优化以提高其产量,实验结果如下:1.从传统发酵奶油制品中分离筛选产CLA水平高的乳酸菌。利用溴甲酚紫平板对产CLA的乳酸菌进行初筛,再利用紫外分光光度法检测发酵液中CLA含量进行复筛以筛选出高产菌株,分析其菌落特征、细胞形态及生理生化特性,并结合16SrDNA序列分析以及系统发育树,鉴定其种属。从样品中共筛出30株产CLA菌株,当LA按发酵培养基的0.06%(v/v),接种量为2%(v/v)时,分离自镶黄旗酸油的11株产CLA菌株中,HS4产量最高,为23.59±0.99μg/mL,经鉴定其为干酪乳杆菌(Lactobacillus casei);分离自正蓝旗稀奶油的9株产CLA菌株中,LX5产量最高,为20.51士0.55μg/mL,经鉴定其为副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei);分离自阿巴嘎旗酸油的10株产CLA菌株中,AS8产量最高,为13.22±0.52μg/mL,经鉴定其为屎肠球菌(Enterococcus faecium)。2.气相色谱法(GC)分析发酵液中CLA的异构体组成情况。菌株HS4所产产物中c9,t11-CLA和t10,c12-CLA在发酵液脂肪酸中的峰面积分别为0.75%和0.71%,相对含量分别为37.94%和35.76%;菌株LX5所产产物中c9,t11-CLA和t10,c12-CLA的峰面积分别为0.75%和0.72%,相对含量分别为35.09%和33.40%;菌株AS8所产产物中c9,t11-CLA和t10,c12-CLA的峰面积分别为0.78%和0.70%,相对含量分别为31.67%和28.75%。3.利用LB培养基、MRS培养基、脱脂乳培养基对培养基的种类进行初步优化,确定了菌株HS4、LX5、AS8的最适发酵培养基均为MRS培养基。通过单因素试验和正交试验优化3株菌的培养基成分,得到HS4、AS8最优培养基成分为:蛋白胨(10g/L)、牛肉膏(10g/L)、酵母浸膏(7g/L)、葡萄糖(2.5%)、乙酸钠(7g/L)、柠檬酸氢二铵(2g/L)、磷酸氢二钾(≥g/L)、硫酸锰(2g/L)、硫酸镁(10g/L),Tween-80(0.10%);LX5最优培养基成分为:蛋白胨(10g/L)、牛肉膏(15g/L)、酵母浸膏(7g/L)、葡萄糖(2.5%)、乙酸钠(7g/L)、柠檬酸氢二铵(2g/L)、磷酸氢二钾(3g/L)、硫酸锰(2g/L)、硫酸镁(10g/L),Tween-80(0.10%)。4.通过单因素试验和响应面方法(RSM)优化菌株HS4、LX5、AS8的发酵条件。得到菌株HS4的最佳发酵条件为:培养温度33℃,培养时间37h,LA添加量0.08%(v/v),接种量2.72%(v/v);菌株LX5的最佳发酵条件为:培养温度33℃,培养时间36h,LA添加量0.07%(v/v),接种量2.70%(v/v);菌株AS8的最佳发酵条件为:培养温度33℃,培养时间36h,LA添加量0.09%(v/v),接种量2.74%(v/v)。3株菌在优化后的条件下,其CLA产量分别提高到43.88±0.75μg/mL、39.91±0.38μg/mL、28.67±0.99μg/mL,分别是未优化前的1.86倍、1.94倍、2.17倍。
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