基因表达的精确定量是研究疾病和组织器官发育相关分子机制、遗传功能的基础。实时定量PCR(qPCR)由于其简单,特异性好,灵敏度高和可定量范围宽而被广泛应用于基因表达定量研究。而使用适当的参考基因以确保精确标准化和定量基因表达尤为重要,例如中枢神经系统(CNS)的早期发育、成熟、衰老到损伤过程的基因表达定量和差异基因的发现都离不开合适的参考基因选择。在本研究中,我们在发育中的小鼠大脑和脊髓中选取了12个候选看家基因(ACTB,CYC1,HMBS,GAPDH,HPRT1,RPL13A,YWHAZ、PPIA、RPLP0,TFRC、GUS和18S rRNA)。在整个CNS发育过程中,我们发现它们的表达水平都存在一定程度的波动,这也再次提示了选择合适的参考基因的重要性和复杂性。在本研究中,我们使用了BestKeeper,geNorm和NormFinder三套不同的算法来评估备选参照基因的稳定性,我们发现GUS是最稳定的基因,而GUS/YWHAB是最稳定的参考基因组合。对不同发育阶段(包括损伤阶段)及不同脑区,这两基因相对稳定而HPRT1和GAPDH表达波动相对较大不适合用作于CNS发育研究的参考基因。因此,我们的研究结果确定了GUS和YWHAZ作为中枢神经系统的发育学表达数据的标准化参考基因,同时他们的组合也优于其他组合可用于基因的表达定量研究。