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本文以甘蔗糖蜜酒精生产菌种酿酒酵母(Saccharomyces cereviviae)Y01和耐高温的马克斯克鲁维酵母(Kluyveromys marxianus)Y05作为出发菌株,应用原生质体融合技术进行属间杂交,选育适合于能源甘蔗汁高温发酵高产酒精的酵母菌种。主要研究内容如下:1.全面考察了融合亲株的生理特性及酒精发酵特性。酿酒酵母Y01和马克斯克鲁维酵母Y05都能发酵甘蔗汁产生酒精。Y01最适生长温度为30℃,最适发酵温度为32℃,能耐受14%(v/v)的酒精和35°Bx的蔗糖,但对温度较为敏感,以18°Bx的能源甘蔗汁为发酵培养基,32℃发酵72h,发酵醪中酒精为10.63%(v/v),40℃发酵72h,发酵醪中酒精降为7.90%(v/v)。Y05最适生长温度为37℃,最适发酵温度为34℃,温度升高对其酒精发酵影响不大。2.确定了酿酒酵母Y01和马克斯克鲁维酵母Y05原生质体制备与再生的最佳条件。菌龄9h的酿酒酵母Y01,在30℃下用1.5%的蜗牛酶+0.5%的纤维素酶处理70min,其原生质体形成率为90.8%～95.3%,再生率为15.1%～21.3%。菌龄8h的马克斯克鲁维酵母Y05,在30℃下用1.0%的蜗牛酶+0.5%的纤维素酶处理50min,其原生质体形成率为94.8%～99.7%,再生率为32.5%～39.8%。2株菌酶解液稳渗剂都采用4%NaCl,稀释和配制再生培养基采用15%蔗糖。3.筛选到1株耐高温高产酒精的融合子(融70),融70在16°Bx的能源甘蔗汁中,以6%的接种量接种,40℃发酵72h,产酒率可达到9.79%。经过十次传代后,其遗传性能稳定。4.采用紫外诱变及TTC鉴别培养基,筛选到4株马克斯克鲁维酵母Y05呼吸缺陷型突变株,比较了呼吸缺陷型突变株与野生菌株的产酒精能力。