【摘 要】
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本实验室之前对红曲菌的研究发现全局调控因子Lae A会对组蛋白乙酰化的水平造成影响。与野生型菌株M7相比,△Mrlae A的组蛋白乙酰化水平明显下降,而过表达菌株trp C(p)::lae A的组蛋白乙酰化水平明显上升。这提示Lae A可能通过调节组蛋白乙酰化来调节各项生命活动。基于此,本研究进一步分析了M7、△Mrlae A、△Mrgcn5、trp C(p)::lae A、△Mrlae A::t
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本实验室之前对红曲菌的研究发现全局调控因子Lae A会对组蛋白乙酰化的水平造成影响。与野生型菌株M7相比,△Mrlae A的组蛋白乙酰化水平明显下降,而过表达菌株trp C(p)::lae A的组蛋白乙酰化水平明显上升。这提示Lae A可能通过调节组蛋白乙酰化来调节各项生命活动。基于此,本研究进一步分析了M7、△Mrlae A、△Mrgcn5、trp C(p)::lae A、△Mrlae A::trp C(P)::Mrgcn5和△Mrgcn5::trp C(P)::Mrlae A菌株在环境胁迫和转录组方面的异同点,为探究Lae A与Gcn5对代谢发育的调控机制和相互作用关系奠定基础,具体研究结果如下:1、构建过表达菌株△Mrlae A::trp C(P)::Mrgcn5和△Mrgcn5::trp C(P)::Mrlae A。本研究首先构建了Mrgcn5和Mrlae A的过表达载体p CMrgcn5和p CMrlae A,然后采用农杆菌介导的转化方法,将过表达载体转入△Mrlae A和△Mrgcn5菌株中,分别获得325和272株转化子,然后通过PCR筛选得到NO.65(△Mrlae A::trp C(P)::Mrgcn5)菌株和NO.31(△Mrgcn5::trp C(P)::Mrlae A)菌株。鉴定结果表明,NO.65菌株中的Mr Gcn5过表达盒以同源重组的形式定点整合到出发菌株△Mrlae A的基因组中,而NO.31菌株中Mrlae A过表达盒以非同源重组的方式整合到出发菌株的基因组中。2、△Mrlae A::trp C(P)::Mrgcn5和△Mrgcn5::trp C(P)::Mrlae A菌株的表型分析。以亲本菌株△Mrlae A和△Mrgcn5为对照,分析△Mrlae A::trp C(P)::Mrgcn5和△Mrgcn5::trp C(P)::Mrlae A在高渗透压、高氧化活性和细胞壁抑制剂的培养基条件下的菌株生长情况。结果表明,Mrgcn5过表达会轻微影响△Mrlae A的氧化调控和渗透压调控过程。而在△Mrgcn5菌株中过表达Mrlae A并未对环境胁迫耐受力产生显著影响。3、转录组水平分析,探究Mrlae A和Mrgcn5调控基因表达变化情况。通过RNA-seq得到转录组数据,筛选差异表达基因,并对其进行GO与KEGG pathway富集分析,发现Mrlae A对有性发育和次级代谢具有直接调控作用,Mrgcn5对核迁移及初级代谢进行调控并进而影响其次生代谢水平。△Mrlae A::trp C(P)::Mrgcn5菌株(lg65)相对△Mrlae A在信号转导和转运活性上发生转录上调,对细胞周期和减数分裂则有负面影响。
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