胚胎干细胞（ESC）能无限增殖，具有可以分化成各种细胞和组织的能力，是在组织工程和细胞治疗中理想的细胞资源。尽管在许多研究工作中，开发出了具有生物相容性的培养基质和适合细胞生长的生物反应器，用于体外干细胞的培养和维持，但是昂贵的细胞生长因子和多能性维持试剂依然使得对ESC进行大量生产是十分困难和具有挑战的。如今，传统中草药（TCHM）由于自身对疾病的治疗效果和对细胞毒性作用低等原因，开始得到了广泛关注。除了疾病治疗外，一些草药还可以通过激活淋巴细胞、增加自然杀伤细胞和抗氧化等方式提高机体免疫力，因此，TCHM也成为了拥有潜在促进ESC增殖能力的新型药物资源。本研究建立了一种简单、高效、可靠和高通量的筛选方法，用于评估TCHM提取物对细胞生长的作用效果。这一筛选平台建立在聚对苯二甲酸乙二酯（PET）为支架进行三维（3D）细胞培养的基础之上，选用转染后稳定表达绿色荧光蛋白（GFP）的小鼠ESC、人乳腺癌和结肠癌细胞系，并采用改良的384荧光孔板对细胞表达的荧光强度进行在线监测，从而对细胞生长动力学进行实时分析，实现动态反映药物对细胞生长影响的效果。通过检测不同浓度下脱氧胆酸、灵芝孢子粉（Gls）、银杏和淫羊藿的水提取物对细胞增殖和细胞毒性的作用，得到的检测结果与已有相关报道中的结果一致。在可靠性分析中，Z检验结果为0.5和1.0之间，证明这种细胞水平药物筛选（CBDS）平台提供的筛选结果变异性小，适合用于TCHM的高通量筛选（HTS）。Gls浓度为0.01%（w/v）时，mESC在旋转瓶中3D动态培养5d后扩增倍数为18.5，与没有添加药物的对照组（扩增13.6倍）相比，扩增倍数提高了36.1%，同时mESC对SSEA-1和Oct-4的表达维持在90%以上。分别将水溶性的灵芝多糖（PSS）和脂溶性的灵芝三萜（TTS）进行分离和提取，并在3D荧光CBDS系统中检测这两种有效成分对mESC细胞的影响，结果显示当PSS和TTS单独作用于mESC细胞时，没有增殖促进效果。对另外6种TCHM在ESC生长中的作用进行了考察，发现三七（Pn）、白术（Ram）、川芎（Rc）和Gls表现出促进ESC增殖的潜力。对这4种药物搭配成的11种药物组合继续进一步筛选，结果显示将Pn和Gls等量混合后，提取物（Pn/Gls）对ESC生长的促进效果十分明显，与没有药物处理的细胞相比，Pn/Gls在较低的剂量下（0.01%w/v）使ESC的比生长速率提高了29.5%（p <0.01），在较高剂量（0.1%w/v）时也使比生长速率增加了34.2%（p <0.05）。之后在旋转瓶反应器中对Pn/Gls在大规模培养环境中促进细胞生长的效果进行验证，5天培养结束后，添加0.01%Pn/Gls的培养基中生长的ESC扩增倍数达到了29.3，而对照组扩增倍数为16.8。此外，在Pn/Gls作用下生长的ESC，生长速率提高的同时对全能性基因阶段特异性胚胎抗原（SSEA-1）和Oct-4基因的表达水平并没有下降，而且细胞核型也没有受到破坏。因此，这种3D荧光细胞水平的筛选方法能够提供高效、可靠的方式，从TCHM中筛选ESC生长促进因子；而通过这种筛选体系得到的药物Pn/Gls在大规模生产高质量ESC的应用当中也具有很好的前景。