欧前胡素与胶原蛋白的紫外光照反应及其机理探究

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欧前胡素是中药白芷的主要活性成分之一,其拥有抗菌、抗癌、舒张血管等多种药理活性。中医用白芷酊剂配合紫外光照治疗白癜风、银屑病等皮肤疾病,必然依赖白芷中的某些醇溶性活性部位的光敏反应,然后使患者病灶皮肤表层变性并脱离机体,使正常的表皮组织生长而治愈。但是,至今未阐明其作用机制。本课题在前人研究的基础上,探究了白芷中光活性最高的欧前胡素和皮肤中含量最高的Ⅰ型胶原蛋白在紫外光照下的光反应;确定胶原蛋白中与欧前胡素反应率最高的氨基酸;探究欧前胡素与该氨基酸的光照反应并分离出光反应产物;通过产物的结构确证和推导,提出欧前胡素光催化胶原蛋白光反应的机制;最后进行欧前胡素光反应的动力学分析。获得的实验结果和结论摘要如下:欧前胡素和欧前胡素-胶原蛋白混合液在发射波长大于400nm光照射下不发生反应,而在紫外光照下,特征吸收波长303nm显著红移到316nm,而在248nm的吸光度减小且红移至269nm;欧前胡素的胶原蛋白混合液经紫外光照后,胶原蛋白中的半胱氨酸完全消耗,XXX减少XX;紫外光照XXX后,特征吸收波长278nm处的峰趋于平滑,在313nm出现新吸收峰,而XXX-欧前胡素混合液紫外光照后的吸收光谱与XXX光照后的类似,说明XXX和欧前胡素紫外光照后发生了化学变化;分析XXX-欧前胡素混合液紫外光照后的高效液相色谱图发现,出现了保留时间22.0min、39.6min和40.9min的新物质,是为生成物,尤以22.0min的物质峰面积最大,采用半制备高效液相色谱分离,22min处的物质分离良好,经过高分辨质谱、氢谱和碳谱分析,证明为8-羟基补骨脂素;39.6min和40.9min的物质分离度不好,采用液质联用仪分析,推断39.6min的物质为别欧前胡素,40.9min的物质为XXX;基于上述三种物质的结构,提出XXX和欧前胡素的光照反应机制为,欧前胡素经紫外光照,其侧链的异戊烯基离去,生成8-羟基补骨脂素,还发生克莱森重排,生成别欧前胡素;离去的异戊烯基的烯键在光照下双键打开,发生加成反应或产生更小的碎片。XXX活性较高的XXXXX结合欧前胡素光照产生的碎片,再与异戊烯基碎片和两分子水发生加成反应生成XXX;最后分析欧前胡素光照反应动力学,研究了不同初始浓度和光照距离下,欧前胡素浓度随时间的变化规律。最后发现,欧前胡素的光反应动力学符合一级动力学模型,光反应的速率与初始浓度和光照距离有关,且加入XXX后能加速欧前胡素的光反应。
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