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目的:1.使用载脂蛋白E(apoE)与阳离子脂质体组合成一种具有靶向性结合肝(癌)细胞的基因运输载体apoE-lipoplexes,检测其转染肝(癌)细胞的效率。2.采用甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)启动子调控的,以增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)为报告基因的,单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virus thymidine kinase,HSVtk)为自杀基因的真核表达质粒pAFP-TK-IRES2-EGFP,将apoE-lipoplexes结合pAFP-TK-IRES2-EGFP质粒转染肝(癌)细胞,检测HSVtk在肝(癌)细胞内的特异表达情况。3.检测apoE-lipoplexes介导AFP启动子调控的TK/GCV自杀基因系统对肝癌细胞的体外杀伤作用。方法:1.制备载脂蛋白E修饰阳离子脂质体(apoE-lipoplexes)和单纯的阳离子脂质体(lipoplexes),分别运载以EGFP为报告基因的pGenesil-1质粒转染肝癌细胞HepG2、HUH-7和Li-7,正常肝细胞HL-7702和大肠癌细胞SW480,流式细胞术检测转染效率。2.检测apoE-lipoplexes与pAFP-TK-IRES2-EGFP质粒复合物在DNaseⅠ中的稳定性。3.以AFP启动子调控的HSVtk自杀基因真核表达质pAFP-TK-IRES2-EGFP作为杀伤质粒,以apoE-lipoplexes运载pAFP-TK-IRES2-EGFP分别转染HepG2、HUH-7、Li-7、HL-7702和SW480细胞,分别采用RT-PCR和western blotting法检测HSVtk基因在mRNA与蛋白水平的表达。4.以pAFP-IRES2-EGFP质粒作对照组,pAFP-TK-IRES2-EGFP作实验组,分别转染肝癌细胞HepG、HUH-7、Li-7,加入前体药物更昔洛韦(ganciclovir,GCV)后,流式细胞术检测细胞死亡率。结果:1.成功合成一种具有肝(癌)细胞靶向结合特性的脂质体apoE-lipoplexes,与单纯的脂质体lipoplexes比较,apoE-lipoplexes对肝(癌)细胞转染效率显著提高,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。2.酶切鉴定pAFP-TK-IRES2-EGFP真核表达质粒后,转染HepG2、HUH-7、Li-7、HL-7702和SW480细胞,经RT-PCR和western blotting检测,HSVtk在甲胎蛋白阳性的HepG2、HUH-7、Li-7细胞内表达,但在甲胎蛋白阴性的HL-7702和SW480细胞内未检测出HSVtk表达。3.与对照组比较,肝癌细胞HepG2、HUH-7、Li-7的死亡率均显著提高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.载脂蛋白E修饰的阳离子脂质体apoE-lipoplexes对肝(癌)细胞具有较高的转染效率。2.apoE-lipoplexes介导AFP启动子调控的自杀基因真核表达质粒pAFP-TK-IRES2-EGFP在甲胎蛋白阳性的HepG2、HUH-7和Li-7肝癌细胞内成功表达。3.apoE-lipoplexes介导HSVtk/GCV自杀基因系统对HepG2、HUH-7和Li-7肝癌细胞具有杀伤作用,对正常肝细胞没有杀伤作用。