Atg7敲除效应通过减弱自噬促进了缺血后适应的脑保护作用

来源 :昆明医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chengyao54321
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[目 的]缺血后适应可以通过激活大鼠早期再灌注过程中的自噬来减轻脑缺血-再灌注带来的损伤。自噬通过一系列自噬相关蛋白完成自噬的过程,其中Atg7是自噬结合系统和自噬体形成所必需的蛋白,它在自噬体的形成过程中起到重要的调控作用。本文研究Atg7在脑缺血后适应对脑组织保护中的作用。[方 法]使用Atg7-/-大鼠及SD大鼠,线栓法制作大鼠大脑中动脉梗死模型(MCAO模型),分别进行脑缺血-再灌注以及脑缺血后适应处理。通过改良神经功能缺损mNSS评分评定大鼠脑梗死后神经功能缺损的严重程度。通过TTC染色测量大鼠脑梗死面积。通过脑水肿干湿重法测定大鼠脑水肿情况。通过Western Blot检测脑缺血半暗带中LC3-Ⅱ和Beclin1的蛋白表达水平。通过免疫组化检测脑缺血半暗带中Atg7的表达水平。[结 果]1.mNSS评分结果:sham组评分为0分,除sham组外,其余各组评分均升高,其中I/R组的评分显著升高,神经功能缺损最严重;IPostC组较I/R组降低(P<0.05,差异有统计学意义);与IPostC组相比,Atg7-/-IPostC组的评分明显减低(P<0.05,差异有统计学意义);而与Atg7-/-IPostC组相比,Rapa+Atg7-/-IPostC组评分有所升高(P<0.05,差异有统计学意义)。2.TTC染色结果:与sham组相比,其余4组均有不同程度的梗死;I/R组脑梗死体积最大,IPostC组较I/R组降低(P<0.05,差异有统计学意义);与IPostC组相比,Atg7-/-IPostC组脑梗死体积明显减小(P<0.05,差异有统计学意义);而Rapa+Atg7-/-IPostC组与Atg7-/-IPostC组相比,梗死体积增加(P<0.05,差异有统计学意义)。3.脑含水量结果:I/R组脑含水量最高,表明有明显的脑水肿;IPostC组较I/R组降低(P<0.05,差异有统计学意义);与IPostC组相比,Atg7-/-IPostC组脑含水量下降(P<0.05,差异有统计学意义);Rapa+Atg7-/-IPostC组较Atg7-/-IPostC组升高(P<0.05,差异有统计学意义)。4.Western Blot检测结果:I/R组LC3-Ⅱ、Beclin1的表达水平较IPostC组升高(P<0.05,差异有统计学意义);与IPostC组相比,Atg7-/-IPostC组明显降低(P<0.05,差异有统计学意义);与 Atg7-/-IPostC 组相比,Rapa+Atg7-/-IPostC组升高(P<0.05,差异有统计学意义)。5.免疫组化检测结果:与I/R组相比,IPostC组Atg7的表达降低(P<0.05,差异有统计学意义);与IPostC组相比,Atg7-/-IPostC组显著降低(P<0.01,差异有统计学意义);与Atg 7-/-IPostC组相比,Rapa+Atg 7-/-IPostC组Atg7的表达升高(P<0.05,差异有统计学意义)。[结 论]1.缺血后适应可以减轻脑缺血-再灌注带来的损伤。2.Atg7敲除减弱了脑缺血后的自噬效应。3.Atg7敲除增强了后适应对缺血-再灌注诱导的急性脑损伤的神经保护作用
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