番茄根际促生菌的筛选及其培养基优化

来源 :山东农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:fredric_cn
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番茄是重要的经济作物,随着种植面积的不断扩大,长期连作,导致了土壤肥力下降、土传病害加重、自毒物质积累等问题,影响番茄可持续生产。植物根际促生细菌(Plant Growth-Promoting Rhizabacteria,PGPR)产生植物生长调节物质、改善或提供土壤肥力、抑制土传病害、诱导系统抗性和耐受性、降解自毒物质;在农业生产中具有广阔应用前景。本研究以番茄根际筛选出的25株促生细菌为对象,进行了菌种鉴定,研究了它们对番茄灰霉病菌的拮抗活性,检测了这些菌株产生长素、铁载体、蛋白酶及溶磷解磷能力,通过盆试验验证其对番茄的促生效果。对促生效果较好的两株菌进行了初步的培养基优化。测定了25株细菌的16S rRNA基因序列,并构建系统发育树。初步确定其分类地位:SH180菌株为沙福芽孢杆菌(Bacillus safensis),SH159为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),JF20和SH160为特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis),SH10和SH69为粪产碱菌(Alcaligenes faecalis),JF12、JF32和JF38属于暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis),JF9、JF33、SH162和SH164属于同温层芽孢杆菌(Bacillus stratosphericus),JF2、JF27、JF31、JF45、SH35、SH81、SH82、SH98、SH122、SH143、SH183和SH184属于厦门芽孢杆菌(Bacillus xiamenensis)。测定了25株菌的植物促生功能。SH180、SH183、SH164、JF27等20个菌株对番茄灰霉病菌具有较强的拮抗活性。JF2和JF38对大肠杆菌也有一定的拮抗效果。SH180、SH183等24个菌株具有产蛋白酶的能力,SH183发酵液蛋白酶活性高达347.61μg/mL。SH10、JF32、SH69等3个菌株具有较强的产铁载体能力,其铁载体活性单位分别为69.27%、65.03%、48.63%。SH160具有产生长素(IAA)能力;上述菌株均没有溶磷解磷能力。通过盆栽试验研究了25株菌对番茄的促生效果。第一次盆栽试验中,与对照相比,SH180、SH183、SH69、SH98、SH164等5个菌株处理的番茄株高分别增加了29.73%、29.05%、23.61%、19.05%、14.29%,其中SH180和SH183菌株处理的番茄株高达极显著差异;SH180处理的番茄地径增加了8.02%;SH183、SH164、SH184、SH180处理的番茄根长分别增加了25.31%,19.87%、14.81%和13.54%。综合各项农艺性状,选定促生效果较好的SH183、SH180、SH164、SH69、SH98等5个菌株进一步进行盆栽试验。第二次盆栽试验中,与对照相比,SH183、SH180、SH164、SH69、SH98菌株处理的番茄株高分别增加了19.13%、17.13%、10.49%、12.45%、2.93%,其中SH183和SH180处理的番茄株高分别达到了极显著差异和显著差异;番茄根长分别增加了22.97%、34.14%、23.78%、16.91%、4.62%,其中SH180处理的番茄根长达到了显著差异;SH164、SH180处理的番茄地径分别增加了12.09%、10.11%,分别达到了极显著差异和显著差异。与对照相比,SH180、SH183、SH164、SH69、SH98处理的番茄茎叶鲜重分别增加了52.46%、35.16%、35.63%、19%、0.28%,其中SH180处理的茎叶鲜重达极显著差异,SH183和SH164达显著差异;SH180、SH164、SH183处理的茎叶干重分别增加了60.31%、55.56%、44.44%,达到极显著或显著性差异。SH164、SH180、SH69、SH183处理的根鲜重增幅分别达到了85.42%、71.88%、43.75%、36.46%,达到了显著或极显著差异;SH180、SH183、SH164、SH69、SH98处理的根干重分别增加了55.56%、55.56%、55.56%、33.33%、38.89%,其中SH180、SH183、SH164处理的根干重达极显著差异,SH69、SH98处理的根干重达到显著差异。选取两次促生试验中效果好且稳定的两株菌,即SH180和SH183进行了培养基优化。以添加3%蔗糖的豆芽汁培养基为基础培养基,通过单因素试验选择适宜的碳源、氮源和无机盐。单因素试验所用碳源为葡萄糖、蔗糖、乳糖、玉米粉和可溶性淀粉;所用氮源为蛋白胨、酵母浸粉、豆粕粉、硝酸钠、氯化铵和尿素;所用无机盐为CaCO3、MgSO4·7H2O、K2HPO4、KH2PO4、FeSO4·7H2O、CuSO4。SH180和SH183的最佳碳源分别是葡萄糖和蔗糖,SH180和SH183的最佳氮源都是豆粕粉,SH180和SH183的最佳无机盐分别是Fe SO4·7H2O和KH2PO4,再利用正交试验,确定最佳培养基配方。SH180最佳培养基:4%葡萄糖,2%豆粕粉,0.003%FeSO4·7H2O。SH183最佳培养基:4%蔗糖,2%豆粕粉,0.3%KH2PO4
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