Phellinus属桑黄遗传多样性分析及瓦尼木层孔菌培养模式优化

来源 :东北林业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:DK7531672
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
采用菌物学、生态学、分子生物学、生物化学等方法,对Phellinus属16株不同来源的桑黄菌株进行基于ITS序列和RAPD分子标记的遗传多样性分析,对瓦尼木层孔菌黑龙江完达山菌株进行了深入系统的研究,包括:生物学特性、分类地位的分子生物学验证、菌丝体培养条件和子实体培育模式的优化、主要成分检测分析、菌丝体多糖的提取纯化与单糖组成鉴定,以及菌丝体发酵液抑制肿瘤细胞增殖的效果等。(1)测定了Phellinus属16个不同来源桑黄菌株的ITS序列,16个菌株的ITS1-5.8S-ITS2序列长度介于590 bp-714 bp之间,其中5.8S序列最为保守,均为160 bp,ITS1长度为220 bp-310 bp,ITS2长度为210 bp~245 bp。同属不同种的桑黄菌株遗传距离较远。同种不同来源10菌株的RAPD分子标记结果表明,10株瓦尼木层孔菌(P. vaninii)遗传多态性丰富,但由于区域相对集中(都在东北的东部山区),RAPD的聚类分析结果与地域分布差异关系不明显,没有表现出地域性的遗传多样性差异。(2)瓦尼木层孔菌黑龙江完达山菌株ITS序列长度为756 bp, GenBank登录号是HQ845057。综合子实体的形态鉴定,确定该菌株为Phellinus vaninii Ljup,隶属担子菌纲、非褶菌目、锈革孔菌科、木层孔菌属。瓦尼木层孔菌分布区域位于寒温带大陆性季风气候的低海拔浅山区(北纬45°23’至46°36’,东经132°11’至133°56’),发生林分为郁闭度超过55%、平均树龄50年以上的天然山杨桦树针阔混交林。子实体常见于阳坡或半阳坡缓坡地带郁闭度较高、近水源的天然林或林间阴湿草旬之中,以山杨为寄主。(3)瓦尼木层孔菌黑龙江完达山菌株菌丝体生长的最佳碳源为葡萄糖、最佳氮源为麦麸、最佳无机盐为硫酸镁。营养因素对菌丝体生长(干重)的影响效应顺序是:麦麸>葡萄糖>硫酸镁(固体培养)和葡萄糖>硫酸镁>麦麸(液体培养)。葡萄糖与麦麸和葡萄糖与硫酸镁的互作效应相对较大。在固体培养最佳条件(配方:马铃薯200 g/L琼脂粉20 g/L、葡萄糖30 g/L、麦麸15 g/L、硫酸镁2 g/L、磷酸二氢钾3 g/L;pH值6.5、温度28℃、完全黑暗、适当的二氧化碳浓度)下,所得菌丝体干重可达12.9g/L;在最佳液体培养条件(配方:马铃薯200g/L,葡萄糖30 g/L,麦麸10 g/L,硫酸镁5 g/L,磷酸二氢钾3g/L, VB1100mg/L; 500 mL三角瓶中装液量280 mL、培养温度为28℃、起始pH值为6.5、摇床转170 r/min、接种4块菌饼)下,振荡培养12d,所得菌丝体干重可达14.5g/L。(4)瓦尼木层孔菌黑龙江完达山菌株子实体代用料栽培最佳出菇模式为:菱形口、“墙式两端二点出菇法”。最佳栽培基质配方:柞树木屑73%、杨树木屑5%、麦麸8%、米糠8%、石膏1%、玉米粉2%、石灰1%、含水量60%-65%,pH6.5。代用料栽培的出菇优化条件包括:塑料菇棚高度不超2 m、宽5 m,地面选择壤土土质,棚内设蓄水沟与棚外相通;棚内散射光300 lx;催蕾期温度以21℃-23℃、相对湿度保持80%为宜;出菇期相对湿度保持在90%左右,温度控制在22℃-25℃。木段栽培最佳模式是柞木段塑料棚保护地出菇模式,木段栽培的出菇优化条件包括:塑料菇棚高度不超1.7 m、宽5 m,催蕾期温度以21℃-23℃、相对湿度保持80%-85%为宜;出菇期相对湿度90%-95%左右、温度控制在22℃-25℃。(5)从瓦尼木层孔菌黑龙江完达山菌株的菌丝体中分离出3种多糖(S1、S2、 S3), S1、S3的主要组成单糖均有葡萄糖、半乳糖、甘露糖,均为葡聚糖形式,但二者多糖结构上存在差异,S1为呋喃型糖,S3为吡喃型糖。(6)对瓦尼木层孔菌黑龙江完达山菌株进行液体深层发酵,观测发酵液的粘度、pH、残糖含量和多糖产量等流变特性,发现其发酵过程中的参数与菌丝干重变化趋势的一致性,即在液体发酵第8d各项指标均达到峰值。利用该菌株菌丝体发酵液的不同提取物,对人结肠癌LoVo细胞增殖进行抑制研究,结果表明:不同提取物的抑制效果差异显著。乙酸乙酯提取物的抑制效果最好,使用浓度1000μg/mL,加药48 h后,抑制率达到87.5%。乙酸乙酯提取物IC50为53.459μg/mL,在此浓度下,’加药后96h的抑制率可达90%,加药120 h的抑制率高达95%。
其他文献
图腾崇拜在对传统生态系统的保护与维持方面为我们提供了一面可以借鉴的镜子。各民族图腾崇拜中传统的保护生态的意识、行为、习俗和措施是在长期的生产和生活实践中形成的,是
目的:探讨纳布啡应用于双侧重睑成形术中的疗效、安全性以及不良反应。方法:选择行双侧重睑成形术就医者56例,采用随机数字表法,随机分成两组,观察组和对照组,每组28例。观察
教师专业发展是学校建设的要务,组织教师团队开展课堂观察活动是促进教师专业发展的极佳途径。为促进教师专业发展的课堂观察活动常以教研组为单位组建团队,观察活动分为观察
针对弱目标检测跟踪问题,提出了基于粒子滤波的多异步传感器检测前跟踪算法。该算法通过对粒子的状态进行时间和空间递推,将雷达对于目标位于不同时刻的回波幅值映射到同一个
桦纤孔菌Inonotus obliquus (Ach.ex Pers.) Pilat,是一种十分珍稀的食药用菌,非常具开发的潜力。药用部分为菌核,可治疗多种疑难疾病,例如高血压、癌症、糖尿病等。其中,对