益气活血解毒方抑制共培养体系中T淋巴细胞迁移、滑膜细胞炎性增殖的作用机制

来源 :北京中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lwm1976
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目的探讨益气活血解毒方抑制共培养体系中T淋巴细胞迁移、滑膜细胞炎性增殖的作用机制,阐明益气活血解毒方治疗类风湿关节炎的潜在作用机制,为中医药防治类风湿关节炎提供相对客观的微观病理基础,为益气活血解毒法的临床应用提供客观实验依据。方法Transwell建立大鼠滑膜细胞株RSC-364细胞与SD大鼠外周血T淋巴细胞共培养体系,益气活血解毒方作为干预措施,IL-1β诱导细胞成炎性损伤模型,IL-1β抑制剂作为阳性对照,刺激24、48 h后分别收集Transwell上下室细胞;HE染色观察滑膜细胞形态变化;流式细胞术检测T淋巴细胞亚群迁移率以及滑膜细胞凋亡率;Western Blot检测Th细胞特异性转录因子T-bet、GATA-3、ROR-γt的表达情况以及RSC-364细胞NF-κB信号通路关键细胞因子表达情况。结果益气活血解毒方干预后,HE染色结果表明:正常组RSC-364细胞及模型组RSC-364细胞形态比较规则,多呈长梭形,细胞核位于细胞中央,形态正常为卵圆形,细胞呈集落性生长;模型组RSC-364细胞生长相对于正常组RSC-364细胞生长更加密集,出现重叠生长情况;与模型组对比,益气活血解毒方1 00 μg/ml组和益气活血解毒方250 μg/ml组RSC-364细胞数量不同程度减少,细胞间隙增大,细胞形态各异且出现细胞核偏移,细胞质受损。流式细胞术结果表明:干预24 h后,益气活血解毒方100 μg/ml组与益气活血解毒方250μg/ml组的CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞迁移量均降低;干预48 h后,益气活血解毒方100 μg/ml组与益气活血解毒方250μg/ml组的CD3+CD4+T细胞迁移量也降低,且益气活血解毒方100 μg/ml组迁移量降低更为明显;益气活血解毒方100 μg/ml组与益气活血解毒方250μg/ml组的CD3+CD8+T细胞迁移量下降,且益气活血解毒方250 μg/ml组迁移量减少更为明显;与正常组相比,模型组RSC-364细胞凋亡率明显下降;与模型组比较,干预24 h后,益气活血解毒方100 μg/ml组RSC-364细胞凋亡率升高;干预48 h后,益气活血解毒方250 μg/ml组RSC-364细胞凋亡率呈上升趋势。Western Blot检测结果表明:干预24 h后,益气活血解毒方250μg/ml组ROR-γt、T-bet表达均明显降低,GATA-3表达明显升高;干预48 h后,益气活血解毒方250 μg/ml组ROR-γt降低显著,益气活血解毒方100μg/ml组GATA-3表达显著提升;干预24 h后,益气活血解毒方100μg/ml组与益气活血解毒方250 μg/ml组RSC-364细胞IKKα/β表达呈现下降趋势;益气活血解毒方100 μg/m]组与益气活血解毒方250μg/ml组RSC-364细胞NF-KBp50表达显著下降。结论益气活血解毒方通过调控Th17与Treg细胞平衡及控制Th1与Th2细胞间的平衡漂移、调节免疫微环境中T淋巴细胞的迁移及浸润;下调NF-κB信号通路激活水平,诱导滑膜细胞凋亡、抑制滑膜关节组织的炎性改变及血管翳形成,达到抑制滑膜细胞炎性增殖及免疫损伤的作用。
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