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目的:观察茶多酚对牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞炎症因子表达的影响,并初探其可能的作用机制。方法:1、酶消化法体外原代培养人脐静脉内皮细胞,Ⅷ因子相关抗原免疫荧光鉴定细胞。常规传代培养,取生长状态良好细胞进行实验。2、CCK-8检测法测定不同浓度TP(5、10、20、40、80、160 mg/L)和Pg-LPS(0.001、0.01、0.1、1、10μg/m L)分别单独作用于HUVEC 12、24、48 h和4、8、24 h的细胞生长活力,筛选TP预刺激浓度和时间及Pg-LPS作用浓度和时间,并将实验分为四组:阴性对照组(Control)、阳性对照组(LPS)、LPS+TP1组、LPS+TP2组。3、普通光学倒置显微镜观察四组实验组细胞形态学变化。4、ELISA法检测四组细胞培养液中MCP-1、IL-6含量。5、Western blot检测四组细胞内MCP-1、IL-6及细胞核、胞浆内NF-κB p65蛋白表达。结果:1、本实验研究条件下原代培养的细胞在形态学上具有内皮细胞典型特征,生长状态良好,经Ⅷ因子相关抗原免疫荧光鉴定为人脐静脉内皮细胞。2、CCK-8结果显示,5、10、20、40 mg/L浓度TP作用HUVEC 12 h时,细胞增殖率随TP浓度增加而升高(P<0.05),浓度增加到80 mg/L时细胞增殖率较前组降低(P<0.05),160 mg/L时增殖率下降至负值;相同浓度TP作用下,三个时间点细胞增殖率随时间增加而降低(P<0.05)。故选取5、40 mg/L高低两个TP浓度预刺激细胞12h,干预Pg-LPS诱导的HUVEC炎症反应。0.01、0.1、1、10μg/m L浓度Pg-LPS作用于HUVEC 4、8和24 h,相同时间作用下,细胞抑制率随浓度增加而升高(P<0.05),同一浓度Pg-LPS作用下,细胞抑制率:24 h>8 h>4 h。选取10μg/m L Pg-LPS作用细胞24 h作为后续炎症反应模型的实验条件。3、倒置相差显微镜观察四组细胞形态:阴性对照组HUVEC大部分细胞贴壁,细胞呈梭性或不规则三角形;LPS组部分细胞变长,细胞密度降低,间隙变大,脱壁稍多。TP干预组细胞密度较LPS组略高,脱壁细胞也较少。4、ELISA检测结果显示,与阴性对照组相比,LPS组细胞外IL-6、MCP-1表达水平升高显著(P<0.05)。TP预处理可显著降低IL-6、MCP-1的分泌(P<0.05),且40 mg/L TP预处理的LPS+TP2组较5 mg/L TP预处理的LPS+TP1组降低更显著(P<0.05)。5、Western blot检测结果显示,与阴性对照组相比,LPS组细胞IL-6、MCP-1蛋白表达显著上调(P<0.05),而TP预处理组IL-6、MCP-1蛋白表达较LPS组明显下调(P<0.05),40 mg/L TP预处理组较5 mg/L TP预处理组下调更显著(P<0.05)。与阴性对照组相比,LPS组细胞核内p65表达增加,胞浆内p65表达降低;TP预处理组与LPS组相比,胞核内p65表达降低,胞浆内p65表达增加(P<0.05)。TP可抑制NF-κB p65的核转位。结论:本研究表明,茶多酚可抑制Pg-LPS诱导的人脐静脉内皮细胞MCP-1、IL-6表达水平上调,具有保护内皮细胞的作用,机制可能与其抑制NF-κB p65的活化有关。