天然磷脂具有许多重要的生理作用，是一种保健、药用价值较高的生物活性物质。除此之外，磷脂亦是一种理想的天然表面活性剂，已广泛用于医药、营养及化妆品等领域。这些领域所需均为高纯的磷脂分级产品。尤其是近年来，磷脂形成的脂质体作为药物载体，用于抗肿瘤药物和基因治疗药物的研究和应用不断增多，对于高纯磷脂分级产品的需求量也愈来愈大。由于目前高纯磷脂分级产品的价格高昂，已成为制约磷脂在医药等领域大量应用的瓶颈。高纯磷脂的分离纯化难度大是造成其价格昂贵的主要原因。在磷脂的分级产品中，除卵磷脂能采用相对较简便的柱色谱法制备外，其他种类的磷脂产品均需HPLC法制备。由于传统的HPLC法为淋洗模式，具有样品上样量小、耗用溶剂量大、产物浓度低、峰拖尾严重等特点，因而生产成本高导致价格昂贵。如何降低生产成本一直是人们期待解决的难题，同时也是高纯磷脂能否满足生物、医药学发展需求的关键所在。 本论文针对目前磷脂利用的现状，为降低成本，研究简单淋洗剂体系的柱色谱法和适合于制备分离的高效置换色谱法分离纯化磷脂产品。为促进和拓宽磷脂在医药学领域的应用，进行了锆镁基质脂质体色谱固定相制备及药物与脂质膜相互作用研究。主要研究内容如下： 1．磷脂色谱定性及定量分析方法的建立。TLC法简便、快捷，且能几个样同时展开，是一种高效快速的磷脂定性分析方法。展开剂为氯仿—甲醇—水(65：25：4，V／V)时，在2.5cm×7.5cm硅胶G薄层板上，卵磷脂(PC)、脑磷脂(PE)、肌醇磷脂(PI)、磷脂酸(PA)和丝氨酸磷脂(PS)能完全分离。HPLC法精度高、易于在线检测。在150mm×4.6mm硅胶柱上，采用乙腈—甲醇—85％磷酸(180：3：1，V／V)为流动相，流速为0.5mL／min，上述五种磷脂混合物能获得较好的分离效果。保留时间、峰高重现性及回收率测定结果显示此方法用于五种磷脂的定性和PC、PE及PI的定量测定，具有较高的精确度。 2．溶剂萃取法与柱色谱法相结合从大豆油脚中分离纯化卵磷脂和脑磷脂研究。大豆油脚先经脱水、脱油，再经95％乙醇浸提后粗分为粗卵磷脂和粗脑磷脂，以硅胶为吸附介质，分别进行柱色谱分离。粗卵磷脂为原料用无水甲醇作为洗脱剂等度淋洗，可获得纯度大于90％的卵磷脂产品；粗脑磷脂为原料用氯仿—甲醇(2：1，V／V)～无水甲醇的梯度淋洗模式洗脱，可获得纯度大于75％的脑磷脂产品。 3．首次研究卵磷脂和脑磷脂二元混合物的置换色谱分离纯化技术。利用简便易行的薄层色谱(TLC)方法筛选出二氯甲烷—甲醇(9：1，V／V)和乙醇胺分别作为流 相和置换剂，在巧0恤x4.6Inln硅胶(3一spm微球，自制)分析柱上成功地对 卵磷脂和脑磷脂两元混合物进行了置换色谱分离。考察了置换剂浓度，流动相 流速，进样量及样品组成等因素对置换分离效果的影响。在置换剂浓度为83咖， 流动相流速为0.lmL/min条件下，84mg的两元混合物(PE:陀为l:1 .16)得到 了很好的置换分离，纯脑磷脂和卵磷脂的得率分别高达94.8%和87.9%。同样 是175mg的两元混合物，当其中脑磷脂和卵磷脂的比例由1:1 .16调至1:4时， 纯脑磷脂和卵磷脂的回收率分别由31 .4%和16.9%上升至56.0%和77.6%，因 此最大允许进样量的确定需结合实际被分离样品中的组成情况来进行实验才具 有实用意义。4.首次建立大豆等天然磷脂的置换色谱分离纯化方法。从制备分离的角度出发， 以产率和回收率为衡量分离效率的指标，考察了置换剂浓度、置换剂流速及进 样量等色谱条件对分离效率的影响;并在此基础上设计了正交试验，通过统计 学方法，对色谱条件进行了优化。在最佳条件下，即:置换剂浓度为167耐，置 换剂流速为0.2毗/min，样品浓度为Znmg/ml.(实际进样为Znlng/InLXO.7mL二 148Ing)，获得脑磷脂和卵磷脂产品的纯度、产率和回收率分别为80.2%， 65.7Ing/h，70.9%和90.5%，272.6Ing/h，88.3%。此外，通过对再生效率的考 察，寻找到二氯甲烷一甲醇一乙酸(60:30:10，V/V)为再生剂及合适的再生条件。5.首次采用涂覆法制备错镁基质脂质体色谱固定相，并考察了其基本色谱性能。 与相同方法制备的硅胶基质脂质体色谱固定相相比，在耐受有机改性剂等方面， 此新型固定相较为稳定。溶质在此固定相上的保留以疏水作用为主，此外，静 电作用也有一定的贡献。通过对错镁基质脂质体色谱固定相上溶质的 1。gk，(ZrOZ书脚与硅胶脂质体色谱柱上的logk:(51助以及文献报道的反映药物- 脂质膜间相互作用数据的比较可知，它们之间存在着较好的线性关系。此结果 表明错镁基质脂质体色谱可以用于药物的筛选。由于错镁与硅胶基质的性质不 同且具有很好的互补性，因此两种基质脂质体色谱联合使用进行药物的筛选能 降低漏选率、提高准确性，在成分复杂的天然活性物质如中草药的筛选方面具 有极大的应用潜力。