人胶质细胞瘤中自分泌运动因子受体的表达及其对侵袭能力的影响

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目的:肿瘤死亡的重要原因之一是肿瘤细胞恶性转移,肿瘤细胞的侵袭与恶性转移也是各类肿瘤的最基本生理特征和发病机理。肿瘤细胞分泌的自分泌运动因子(Autocrine motility factor,AMF)和AMF相结合的自分泌运动因子受体(autocrine motility factor receptor,AMFR)是恶性肿瘤细胞迁移和侵袭研究的热点之一,已有研究证明AMFR在食管肿瘤、胃肠道肿瘤和膀胱癌中高表达,并且参与其发病,但AMFR在神经胶质细胞瘤中的相关研究尚未见报道。本文旨在研究自分泌运动因子受体(AMFR)在不同恶性程度的胶质瘤以及人不同的胶质瘤细胞株的表达及其对侵袭能力的影响。  方法:⑴利用组织芯片免疫组化技术检测AMFR在不同恶性程度的脑胶质细胞瘤及正常组织在组合芯片上的表达;⑵应用RT-PCR及Western blot分别检测LN229,U251,U373细胞中AMFR的mRNA和蛋白表达量;用MTT的实验方法检测LN229,U251,U373三种细胞的增殖能力;应用伤口愈合实验(Wound healing assay)检测LN229,U251,U373的细胞迁移能力;研究脑胶质瘤的恶性程度与AMFR的表达量的相关性;⑶分别在AMFR高表达且侵袭能力较高的胶质瘤细胞系中应用AMFR shRNA腺病毒下调AMFR蛋白表达量,在AMFR低表达且侵袭能力较低的胶质瘤细胞系中应用AMFR cDNA腺病毒增加AMFR蛋白表达量,应用伤口愈合实验和Transwell侵袭小室实验来检测AMFR的表达量与胶质瘤细胞迁移和侵袭能力的相关性。  结果:①利用组织芯片免疫组化技术检测AMFR在不同恶性程度的脑胶质细胞瘤及正常组织在组合芯片上的表达,制作8至77岁患者正常组织、Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级不同恶性程度肿瘤组织共计78例石腊组织芯片,进行IHC染色AMFR,对组织芯片上染色结果进行定位后根据染色强度分为阴性、弱阳性、阳性、强阳性。运用Spearman’s统计学方法进行相关性检验,结果表明脑胶质瘤组织的恶性程度与AMFR的量呈正相关;②应用RT-PCR及Western blot分别检测LN229,U251,U373细胞中AMFR的mRNA和蛋白表达量;用MTT的实验方法检测LN229,U251,U373三种的细胞增殖能力;应用伤口愈合实验(Wound healing assay)检测LN229,U251,U373的细胞迁移能力;研究脑胶质瘤的恶性程度、细胞的增殖情况、迁移运动能力与AMFR的表达量的相关性;结果表明LN229 AMFR表达量与细胞增殖、运动能力最大,U251 AMFR表达量与细胞增殖、运动能力最小;③分别在LN229细胞系中应用AMFR shRNA腺病毒下调AMFR蛋白表达量,在U251细胞系中应用AMFR cDNA腺病毒增加AMFR蛋白表达量,应用伤口愈合实验和Transwell侵袭小室实验来检测AMFR的表达量与胶质瘤细胞迁移能力的相关性,实验结果证明AMFR参与胶质瘤细胞肿瘤迁移与侵袭。  结论:应用组织芯片免疫组化技术验证AMFR表达量与临床恶性肿瘤程度呈正相关;应用腺病毒干扰和过表达AMFR量,证明了在人肿瘤细胞系中AMFR参与调节肿瘤细胞的运动能力和侵袭。
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