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目的:血管性痴呆(Vascular Dementia,VaD)是严重影响人类健康的一种认知功能障碍疾病,随着脑血管病的发病率逐年升高,已成为导致痴呆的第二大常见类型。对VaD的研究已成为研究热点,探索并明确VaD的治疗和预防措施十分有意义。本课题研究目的主要包括:1.观察“加味不忘散”(Modified Bu-Wang Powder,MBWP)对VaD模型大鼠的学习记忆能力的影响;2.研究MBWP对VaD大鼠海马神经元形态和突触结构的影响;3.探索MBWP对VaD模型大鼠海马突触可塑性的影响;4.研究MBWP防治VaD的作用机制。方法:1.将200只雄性SD大鼠随机分为5组,每组40只。分别为假手术组(Sham control)、VaD模型组(VaD model)、VaD模型+MBWP低剂量干预组(Low dose MBWP group,MBWP low)、VaD模型+MBWP中剂量干预组(Medium dose MBWP group,MBWP medium)、VaD模型+MBWP高剂量干预组(High dose MBWP group,MBWP high)。2.通过双颈总动脉永久结扎方法制备VaD大鼠模型,MBWP灌胃治疗4周。3.运用Y迷宫、Morris水迷宫、穿梭箱实验等行为学方法测定MBWP对VaD模型的学习记忆能力的影响;4.运用在体LTP检测大鼠海马组织的突触可塑性;5.通过HE染色观察大鼠海马的组织结构改变;6.采用透射电镜观察海马超微结构变化;7.应用RT-PCR技术检测海马内GAP43、SYN、PSD-95、MAP-2、BDNF和TrkB mRNA的水平;8.应用Western-Blot技术检测海马内GAP43、SYN、PSD-95、MAP-2、BDNF和TrkB蛋白水平的变化。9.采用SPSS 24.0和Graphpad prism 7.0软件对数据进行统计分析和作图。结果:1.在Morris水迷宫定位航行实验中,与Sham control相比,VaD model大鼠的平均逃避潜伏期从第3天开始延长(P<0.01),VaD model大鼠对空间标志物的学习能力减退;与VaD model大鼠相比,从第3天开始,MBWP low、medium、high大鼠的平均逃避潜伏期显著性缩短。MBWP high改善VaD大鼠的空间学习能力的效果最好。在空间探索实验中,与Sham control相比,VaD model大鼠在目标象限停留时间显著性减少(P<0.001),VaD大鼠的空间记忆能力受损严重。MBWP medium、high大鼠在目标象限停留时间延长,差异具有统计学意义(P<0.001)。各组大鼠到达可视平台的时间和游泳速度没有统计学差异(P>0.05),提示造模和药物对大鼠的视力和游泳能力没有影响。2.Y迷宫自发交替实验中,与Sham control相比,VaD model大鼠的进臂自发交替正确率显著性降低(P<0.001),VaD大鼠的工作记忆能力受损严重。MBWP medium、high可以提高自发交替正确率,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.001),MBWP能显著改善VaD大鼠的空间工作记忆能力。各组大鼠的进臂总次数之间没有统计学差异,提示VaD模型的造模方法和MBWP干预对大鼠的运动能力和探索空间的欲望都没有影响。3.穿梭箱实验中,与Sham control相比,VaD model大鼠的主动回避率显著性降低(P<0.001),主动回避潜伏期显著性延长(P<0.001),VaD大鼠回避伤害性刺激的学习记忆能力受损严重。与VaD model相比,MBWP medium、high大鼠的主动回避率显著性增高(P<0.001),主动回避潜伏期显著性缩短(P<0.001)MBWP能显著改善VaD大鼠回避伤害性刺激的学习记忆能力。MBWP high干预效果最好。4.在体场电位记录实验中,与Sham control相比,VaD model大鼠的f-EPSP斜率百分比显著性降低,LTP有显著性压抑作用(P<0.001),VaD大鼠海马突触可塑性受损严重。与VaD model相比,MBWP medium、high逆转了VaD大鼠维持LTP的压抑作用(P<0.001),MBWP能显著改善VaD大鼠的突触可塑性。5.通过HE染色观察大鼠海马组织结构改变,VaD model和MBWP low大鼠海马神经元数量显著性减少,细胞体积缩小,核固缩,排列紊乱;MBWP medium、high大鼠海马神经元数量增多、排列整齐、异常细胞减少。6.采用透射电镜观察海马超微结构变化,结果显示,VaD model大鼠海马内的突触结构被破坏,突触数量减少,突触结构不完整,突触间隙增大,突触后膜上的致密物质变薄。与VaD model相比,随着MBWP干预剂量的增加,海马内突触结构逐渐变完整,突触间隙由大变小,突触后膜上的致密物也由少变多。7.通过分子生物学检测各组大鼠海马内突触相关蛋白GAP43、SYN、PSD-95、MAP-2的改变,结果显示,VaD model大鼠海马中GAP43、SYN、PSD-95、MAP-2转录水平和表达蛋白水平平均比Sham control显著性降低(P<0.05)。与VaD model相比,随着MBWP干预剂量的增加,海马中GAP43、SYN、PSD-95、MAP-2转录和表达水平逐渐升高(P<0.05)。8.通过分子生物学检测各组大鼠海马内BDNF和TrkB的改变,结果显示,VaD model大鼠海马中BDNF和TrkB转录和表达水平与Sham control相比均显著性降低(P<0.05)。与VaD model相比,随着MBWP干预剂量的增加,海马中BDNF和TrkB转录和表达水平逐渐升高(P<0.05)。结论:1.MBWP显著提高了VaD模型大鼠的学习记忆能力,且治疗效果具有剂量依赖性。2.MBWP改善了VaD模型大鼠海马的神经元数目、神经元结构、突触数量、突触超微结构。3.MBWP可以剂量依赖性的改善VaD模型大鼠海马的突触可塑性。4.MBWP提高了海马内GAP43、SYN、PSD-95、MAP-2的转录和翻译水平。5.MBWP可以上调海马内BDNF-TrkB信号通路。由此提示,MBWP可能对治疗VaD具有一定的积极意义。本课题受2018年山西省教育厅研究生优秀创新重点项目“加味不忘散对血管性痴呆大鼠学习记忆的影响及其突触可塑性机制研究(编号:2018BY070)”资助。