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唾液是人体重要体液之一,其成分相对稳定,人类唾液蛋白质组图发现唾液中有20%的蛋白质与血液中所含蛋白质相同。同时唾液也受全身各种因素和状态的影响,能够很好反映血液中各种蛋白质水平的变化,可作为疾病诊断、疗效判断、药物监测的参考指标,在疾病诊治中具有很好的应用前景。而且与血清标本相比,唾液采集无创伤,安全方便,无血源性疾病传染的危险,因此唾液诊断方法是当前检测方法的一个补充。但由于很多成分在唾液中的浓度远低于血液,以往的技术难以将其检测出来。随着生物传感技术迅速发展,电化学免疫传感技术因其方法简单、灵敏度高、选择性强等优点而被广泛应用于微量物质的测定。电化学免疫传感技术的基础是氧化还原活性中心与电极间的电子传递。它可以通过两种不同的途径实现,一方面活性中心与电极间的电子传递的介质非常重要;另一方面,生物活性分子的固定化对构筑生物传感器作用重大,这是影响生物传感器的稳定性、灵敏度和选择性的两个关键因素。本文选择唾液中高丰度蛋白质sIgA作为标志物,利用比表面积大、表面活性高的纳米材料和电子介体硫堇层层组装,通过静电吸附和金-氮(Au-N)、金-硫(Au-S)共价键作用实现了电子介体的有效固定,从而构建了性能优良的介体型唾液免疫传感器。同时,还对Nafion与纳米金、碳纳米管与纳米金结合作为固定基质在唾液免疫传感器领域的应用做了探索和研究。具体研究内容如下:1.基于金纳米粒子/硫堇/Nafion膜修饰的可再生唾液sIgA免疫传感器的研制通过层层自组装将硫堇(ThI)和纳米金(GNPs)修饰到Nafion修饰的玻碳(GCE)电极表面,利用纳米金单层吸附唾液分泌性免疫球蛋白A(sIgA),最后用辣根过氧化物酶(HRP)封闭电极上的非特异性吸附位点,构建了一种检测唾液sIgA的新型电流型纳米免疫生物传感器。该生物传感器灵敏度高、特异性好、测试方便,检测线性范围为6.5-300 ng/mL,检出限为3.0 ng/mL;电流值达到95%稳态时间小于20 s。探讨了抗体及底物浓度、pH值和温度、孵育时间、干扰物对传感器的影响。该传感器与ELISA法相关性良好(r=0.98932,P<0.001),可用于唾液sIgA的快速检测,从而判断人体局部免疫状况。2.基于功能化碳纳米管/聚硫堇/金纳米粒子层层自组装修饰的可再生唾液sIgA免疫传感器的研制将壳聚糖(CHI)分散的羧基化多壁碳纳米管(MWNTs)吸附到GCE表面,形成负电荷界面,利用静电吸附和金-氮(Au-N)、金-硫(Au-S)共价键作用将阳离子电子媒介体THI和GNPs层层自组装到电极表面,通过GNPs单层吸附唾液sIgA,最后用HRP封闭电极上的非特异性吸附位点,同时放大电流信号,构建了一种检测唾液sIgA的新型纳米免疫生物传感器。实验结果表明,该传感器具有良好的准确性和稳定性;检测线性范围为3.0-350 ng/ml,r=0.98967(P<0.001);检出限为1.5 ng/mL(S/N=3);电流值达到95%稳态时间小于20 s;可用0.1 mol/L的甘氨酸再生8次。探讨了底物浓度、抗体浓度、孵育时间、温度和pH值及干扰物质对该传感器的影响。该免疫传感器灵敏度高、特异性好、方便可再生,可用于唾液sIgA的快速检测,从而判断人体局部免疫状况。