论文部分内容阅读
目的通过诱导结肠炎小鼠模型,观察清肠化湿方对结肠炎小鼠的治疗作用,并研究清肠化湿方对结肠炎小鼠吲哚胺2,3-双加氧酶1（IDO1）、辅助性T细胞17（Th17）/调节性T细胞（Treg）相关细胞因子的表达情况。方法24只SPF级、健康的雄性（C57BL6/J）小鼠,随机分为空白组（Ctrl组）,模型组（DSS组）,清肠化湿方低剂量组（12g/kg）（QCHS-L组）,清肠化湿方高剂量组（24g/kg）（QCHS-H组）,每组6只。第1-13天,空白组小鼠自由饮用纯水,模型组小鼠按照0.2mL/20g小鼠体重给予纯水灌胃,清肠化湿方低剂量组以12g/kg的浓度按照0.2mL/20g小鼠体重给予中药灌胃,清肠化湿方高剂量组以24g/kg的浓度按照0.2mL/20g小鼠体重给予中药灌胃。实验第4天,除空白组外,其余3组小鼠分别给予2.5%的DSS溶液自由饮用,为期7天。每日观察各组小鼠的一般情况,记录小鼠体质量,粪便性状及便血情况,并计算各组小鼠疾病活动指数（DAI）评分。给药结束后,取材时量取各组小鼠的结肠长度,记录并拍照。苏木素-伊红（H＆E）染色观察各组小鼠结肠组织病理学改变。实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测各组小鼠结肠组织炎症指标IL-6、IL-1 β、TNF-α的mRNA表达水平。qRT-PCR法检测ID01的mRNA表达水平。qRT-PCR法检测Th17细胞相关RORγ t、IL-17、IL-22、IL-23的mRNA表达水平。qRT-PCR法检测Treg细胞相关Foxp3、IL-10、TGF-β的mRNA表达水平。蛋白免疫印迹法（Western Blot）检测各组小鼠结肠组织IDO 1、RORγt、Foxp3的蛋白表达水平。结果1.DAI评分:与空白组相比,模型组小鼠DAI评分升高（P＜0.01）;与模型组相比,清肠化湿方高剂量组DAI评分显著降低（P＜0.05）。2.结肠长度:与空白组相比,模型组小鼠结肠长度缩短（P＜0.0001）;与模型组相比,清肠化湿方高剂量组小鼠结肠长度明显增加（P＜0.05）。3.结肠组织病理:空白组小鼠结肠组织结构完整,隐窝结构完整,无溃疡形成,未见炎性细胞浸润;模型组小鼠见大片黏膜上皮、隐窝结构破坏,黏膜、黏膜下层见大量炎性细胞浸润;清肠化湿方低剂量组隐窝结构部分存在,但黏膜层较多炎性细胞浸润;清肠化湿方高剂量组炎性细胞浸润减少,黏膜损伤较少,结构趋于正常。4.结肠组织炎症指标IL-6、IL-1β、TNF-α的mRNA表达:与空白组相比,模型组小鼠 IL-6、IL-1β、TNF-α 的 mRNA 表达水平增加（P＜0.05,P＜0.0001,P＜0.001）;与模型组相比,清肠化湿方低剂量组、高剂量组下调TNF-α的mRNA表达水平（P＜0.05）,清肠化湿方高剂量组下调IL-1β的mRNA表达水平（P＜0.05）。5.结肠组织IDO1的mRNA表达:与空白组相比,模型组小鼠IDO1的mRNA表达显著增加（P＜0.01）;与模型组相比,清肠化湿方低剂量组、高剂量组下调IDO1的mRNA表达水平（P＜0.05,P＜0.01）。6.结肠组织Th17细胞RORγt及其相关细胞因子的mRNA表达:与空白组相比,模型组小鼠RORyt、IL-17、IL-22及IL-23的mRNA表达水平明显增加（P＜0.01）;与模型组相比,清肠化湿方低剂量组、高剂量组下调IL-17、IL-22、IL-23的mRNA表达水平（P＜0.05,P＜0.01）,清肠化湿方高剂量组下调RORyt的mRNA表达水平（P＜0.001）。7.结肠组织Treg细胞Foxp3及其相关细胞因子的mRNA表达:与空白组相比,模型组小鼠Foxp3的mRNA表达降低;与模型组相比,清肠化湿方高剂量组上调Foxp3、IL-10、TGF-β的 mRNA 表达水平（P＜0.05,P＜0.01）。8.结肠组织IDO1、RORγt、Foxp3的蛋白表达:与空白组相比,模型组小鼠IDO1、RORyt蛋白表达水平升高,Foxp3蛋白表达水平降低;与模型组相比,清肠化湿方低剂量组下调RORyt蛋白表达水平（P＜0.05）,清肠化湿方高剂量组下调IDO1、RORyt蛋白表达水平（P＜0.05）,上调Foxp3蛋白表达水平（P＜0.05）。结论清肠化湿方能够有效治疗小鼠溃疡性结肠炎,缓解肠道炎症,促进其恢复,且清肠化湿方高剂量组（24 g/kg）治疗效果更明显,其作用机制可能与下调IDO1表达,调节Th17/Treg相关细胞因子表达的动态平衡相关。