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1.含红、黄芪益气养血汤含药血清对SAMP8小鼠脾淋巴细胞免疫功能影响研究目的:以含红芪和含黄芪的益气养血汤及等体积生理盐水分别灌胃青龄小鼠后制备含药血清,将含药血清与SAMP8小鼠脾脏淋巴细胞共培养,检测含药血清对SAMP8小鼠脾淋巴细胞体外增殖能力,培养上清液中细胞因子含量,T淋巴细胞亚群以及脾淋巴细胞内p38 m RNA和蛋白的表达的影响,以比较含红、黄芪的益气养血汤含药血清对SAMP8小鼠脾脏淋巴细胞免疫功能影响并探讨相关机制。方法:取清洁级昆明种青龄小鼠30只,雌雄各半,随机分为3组,每组10只,分别以含红芪的益气养血汤,含黄芪的益气养血汤每日6g·Kg-1剂量以及等体积的生理盐水灌胃,每日1次,连续灌胃14次,末次灌胃两小时后眼球摘除取血,制备含药血清。益气养血红芪组、益气养血黄芪组及空白血清组分别按照最佳含药血清培养浓度和时间与SAMP8小鼠脾脏淋巴细胞共培养,青龄鼠组和SAMP8组以含10%胎牛血清的完全培养液分别与青龄小鼠脾淋巴细胞及SAMP8小鼠脾淋巴细胞共培养。以MTT法检测各组淋巴细胞在Con A诱导下的体外增殖能力,以流式细胞术检测各组T淋巴细胞亚群分化,ELISA测定细胞培养上清液中IL-2和IFN-γ的含量,实时荧光定量PCR检测各组淋巴细胞内p38 m RNA的表达量,Western-Blot检测各组淋巴细胞内p38蛋白含量。结果:与青龄鼠组相比较SAMP8组脾淋巴细胞体外增殖能力明显降低;T淋巴细胞中CD8+T细胞百分比明显降低,CD4+T细胞百分比及CD4+/CD8+明显升高,CD152+T细胞百分比也明显升高;细胞培养上清液中IL-2和IFN-γ的含量减少;脾淋巴细胞中p38m RNA及蛋白的表达减少,P<0.05差异有统计学意义。与空白血清组相比给药组脾淋巴细胞体外增殖能力明显增强;T淋巴细胞中CD152+T细胞百分比也明显降低;细胞培养上清液中IL-2和IFN-γ的含量增多;脾淋巴细胞中p38 m RNA及蛋白的表达升高,P<0.05差异有统计学意义。与益气养血黄芪组相比红芪组淋巴细胞增殖能力较强;T淋巴细胞中CD152+T细胞百分比较低;培养上清液中IL-2含量较多;淋巴细胞内p38m RNA表达较高,P<0.05差异有统计学意义。结论:含红芪和含黄芪的益气养血汤含药血清均能促进SAMP8小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖,影响T细胞亚群分化,增加IL-2和IFN-γ的分泌,提高淋巴细胞内p38 m RNA及蛋白的表达,改善衰老小鼠免疫功能,且在提高增殖能力、促进IL-2分泌及提高p38m RNA的表达量方面红芪组优于黄芪组。2.含红、黄芪益气养血汤对SAMP8小鼠免疫功能影响研究目的:以含红芪和含黄芪的益气养血汤、胸腺肽及等体积生理盐水分别灌胃SAMP8小鼠和青龄小鼠后取血及脾脏,检测含红、黄芪的益气养血汤对SAMP8小鼠血清中细胞因子含量,脾脏T淋巴细胞亚群以及脾淋巴细胞内p38 m RNA和蛋白表达的影响,以比较含红、黄芪的益气养血汤对SAMP8小鼠免疫功能的影响并探讨相关机制。方法:取昆明种青龄小鼠10只为青龄鼠组,SAMP8小鼠40只随机分为4组:胸腺肽组、生理盐水组、益气养血红芪组和益气养血黄芪组。分别以生理盐水,胸腺肽每日4.6mg?Kg-1,含红、黄芪的益气养血汤每日6g?Kg-1剂量灌胃小鼠,每日1次,连续灌胃14次,末次灌胃后两小时眼球摘除取血及脾脏,制成血清和脾淋巴细胞悬液。ELISA检测其血清IL-2、IFN-γ含量,流式细胞术检测其脾脏淋巴细胞表面CD3、CD4、CD8、CD28及CD152分子的表达情况,实时荧光定量PCR检测其p38 m RNA的表达情况,Western-Blot及免疫组化法检测其p38蛋白表达。结果:与青龄鼠组比较生理盐水组SAMP8小鼠血清中IL-2和IFN-γ含量降低;脾脏T淋巴细胞中CD8+T细胞和CD28+T细胞百分比降低,CD4+T细胞百分比增高,CD152+T细胞百分比增高;脾淋巴细胞内p38 m RNA及蛋白表达降低,P<0.05差异有统计学意义。与生理盐水组相比胸腺肽组及中药组均能提高SAMP8小鼠血清中IL-2、IFN-γ含量,胸腺肽组含量高于中药组,红芪组IL-2含量高于黄芪组;胸腺肽组及中药组均能提高T淋巴细胞中CD28+T细胞百分比,降低CD152+T细胞百分比,胸腺肽组及黄芪组CD152+T细胞百分比低于红芪组;中药组能提高SAMP8小鼠T淋巴细胞中CD8+T细胞百分比,且黄芪组CD8+T细胞百分比高于红芪组;胸腺肽组及黄芪组能降低CD4+T细胞百分比;胸腺肽组及中药组均能提高p38 m RNA表达,且胸腺肽组m RNA表达高于中药组,黄芪组高于红芪组;胸腺肽组及中药组均能提高p38蛋白含量及蛋白阳性率,且胸腺肽组优于中药组,P<0.05差异有统计学意义。结论:含红、黄芪的益气养血汤均能通过提高SAMP8小鼠血清中IL-2和IFN-γ含量,影响脾脏T细胞亚群分化,增加脾淋巴细胞内p38 m RNA及蛋白表达,改善SAMP8小鼠的免疫功能,且在提高CD8+T细胞百分比方面益气养血汤复方作用优于胸腺肽,在提高血清中IL-2含量方面红芪组优于黄芪组。