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目的观察独活寄生汤干预兔OA模型血清及关节腔积液IL-1、TNF-a的影响,采用蛋白组学技术筛选出独活寄生汤干预兔OA模型关节软骨差异表达蛋白,进一步通过Western验证兔OA模型关节软骨Wnt相关蛋白,找到独活寄生汤可能作用靶点,探讨独活寄生汤的抗炎与软骨保护作用机制。方法1.兔30只,采用石膏伸直位固定8周法制作兔膝骨关节炎(OA)模型,随机分为空白组、模型组、独活寄生汤组,每组10只。空白组兔正常饲养,未造模,8周后每日灌胃生理盐水1次；模型组兔制作OA模型,8周后每日灌胃生理盐水1次；独活寄生汤组兔制作OA模型,8周后每日独活寄生汤煎剂灌胃1次；各组共治疗4周,4周后处死兔,收集血清、关节腔积液、膝关节软骨。2.膝关节软骨经HE染色,光镜下观察各组兔的病理改变,依据改良的Mankin关节软骨病理评分标准对软骨进行半定量评分。酶联免疫吸附法(ELISA)检测兔血清、关节腔积液IL-1、TNF-a水平；3.提取各组兔膝关节胫骨关节软骨的蛋白质后,经过双向凝胶电泳分离蛋白,ImagescannerII扫描仪平板上图像扫描,ImageMaster2-DE Platinum6软件对凝胶图像进行数据分析,用Corbett方法GE公司的ImageMaster检测凝胶内蛋白质点,参照Gharahdaghi等建立的标准方法进行蛋白质胶内酶解,肽段样品结晶后,使用MALDI-TOF-TOF质谱仪进行质谱鉴定。采用阳离子反射模式扫描肽段PMF,扫描质量范围800-3500Da。使用GPS软件综合分析MS/MS.进行网上数据库比对,EXPASY分析所有差异蛋白质的信息,使用PATHWAY Studio软件分析重要差异蛋白质的调控通路。4.筛选出差异蛋白后,提取软骨组织蛋白,Western blot法检测各组兔软骨组织wnt3a、β-连环蛋白、MMP13蛋白的表达。结果1.病理结果显示,空白组软骨关节表面光滑、平整,光镜下软骨细胞分层排列清楚,潮线清晰、完整；而模型组软骨关节表面欠光滑,不平整,可见浅表区粗糙,局部出现软骨粘液样变、肿胀,有裂隙,出现陷窝,软骨细胞及深层细胞数目明显减少,符合骨关节炎病理改变,提示造模成功。而独活寄生汤组关节表面较光滑平整,软骨细胞及深层细胞数目增多,结构改善。Mankin半定量评分结果显示,模型组兔计分明显升高,与空白组相比较,差异有统计学意义(P<0.01)。而经独活寄生汤处理后,兔计分明显降