【摘 要】
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花生(Arachis hypogaea L.)是世界上广泛种植的一种经济作物,其胚的发育对产量和品质有重大影响。缺钙影响花生胚发育与地下结果,导致空荚或不饱满。ABA对于调控植物生长发育以及某些植物胚基因的特异表达有重要作用。目前对花生形态与生理生化等方面研究报道众多,而对相关分子调控机制研究报道较少。本研究通过筛选花生早期胚SSH文库获得了两个CYP707A家族基因,AhCYP707A4-1与A
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花生(Arachis hypogaea L.)是世界上广泛种植的一种经济作物,其胚的发育对产量和品质有重大影响。缺钙影响花生胚发育与地下结果,导致空荚或不饱满。ABA对于调控植物生长发育以及某些植物胚基因的特异表达有重要作用。目前对花生形态与生理生化等方面研究报道众多,而对相关分子调控机制研究报道较少。本研究通过筛选花生早期胚SSH文库获得了两个CYP707A家族基因,AhCYP707A4-1与AhCYP 707A4-2,并对其进行了表达与功能分析。分析了两个基因在胚发育不同时期以及在花生果皮、种皮和胚中的表达调控特征;在缺钙与足钙条件下的胚中的表达情况;通过构建植物表达载体转化烟草分析了这两个基因的功能。同时,利用耐缺钙与不耐缺钙花生品种,分析了这两个基因以及ABA信号通路相关基因的表达模式。主要研究结果如下:1.克隆了花生8’-羟化酶基因AhCYP707A4-1的表达序列(长1,446bp,编码481个氨基酸)。生物信息学分析表明该基因与多种其他植物的CYP707A基因具有高度同源性。通过该基因与GFP基因在洋葱表皮细胞瞬间融合表达,定位其蛋白产物于细胞质中。在激素ABA处理下,该基因在花生中上调表达。qRT-PCR分析表明,该基因在花生生长发育的不同时期与不同组织器官中的表达均有明显差异,是一个受钙胁迫上调表达的基因。与非转基因烟草比较,过量表达该基因的烟草株高略有降低,花与果实等组织器官变小,种子不饱满,生长发育较为迟缓。2.克隆了花生8’-羟化酶基因AhCYP707A4-2的开放阅读框(长1,446bp,编码481个氨基酸)。BlastP分析表明,AhCYP707A4-2与其他物种相应蛋白氨基酸序列有较高的保守性。通过该基因与GFP基因在洋葱表皮细胞瞬间融合表达分析,定位其蛋白质产物于细胞质中。在外源ABA作用下,花生AhCYP707A4-2基因表达上调。qRT-PCR分析表明该基因在花生胚发育全过程起作用,且受钙胁迫诱导表达。过量表达该基因的本氏烟草花器官变小,果实不饱满,分节较为疏散,结果数减少,饱果率较低,不育种子较多。3.qRT-PCR结果表明,花生CYP707A家族基因以及ABA信号通道相关基因受钙胁迫诱导上调表达,在耐缺钙与不耐缺钙花生中的表达有明显差异。在耐缺钙材料中,PYL7、PYR1和NCED1基因在足钙时的表达量均高于缺钙,而CYP707A1和CYP707A2基因却与此相反。在不耐缺钙花生材料中,缺钙使AhCYP70 7A4-1和AhCYP 707A4-2基因表达上调。
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