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背景:CD3+CD56+NKT样细胞是一种能同时表达T细胞与NK细胞的表面标志,兼具有T淋巴细胞强大的抗瘤活性和NK细胞非主要组织相容性(Major Histocompatibility Complex,MHC)杀瘤特点,被认为是增殖速度最快、杀瘤活性最强、杀病谱最广的免疫活性细胞。其可以在体外用多种细胞因子共同培养后获得的一群异质免疫活性细胞,又被称为多种细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokine Induced Killer,CIK),在肿瘤患者外周血体外活化及过继免疫治疗中具有广泛的作用。NKT样细胞不仅是一种高效的免疫效应细胞,可以在体外直接杀伤肿瘤细胞,同时也是一种免疫抑制性调节细胞,在机体的免疫自稳、抗感染和抗肿瘤以及移植免疫等方面发挥重要作用。为了揭示其在自身免疫性疾病中的生物学作用,通过不同体外刺激方法,来阐明其对体外刺激的敏感性以及在调节炎症免疫中的作用方式,进而为其在自身免疫性疾病中发挥更大的生物学活性提供实验依据。 目的:通过检测系统性红斑狼疮(Systemic Lupus Erythematosus,SLE)患者外周血CD3+CD56+自然杀伤样T(NKT样)细胞的表达以及体外活化后的增殖情况和Th1型细胞因子干扰素γ(IFN-γ)和Th2型细胞因子白介素-4(IL-4)的表达,来探讨其在SLE中免疫调节方式及生物学作用。 方法:收集2010年3月-7月在安徽医科大学第一附属医院风湿免疫科住院SLE患者30例和门诊体检的年龄、性别与患者相匹配的健康对照组20例,且SLE患者按照疾病活动与疾病稳定分组。提取SLE患者及健康对照组外周血单个核细胞(Peripheral Blood Mononuclear Cell,PBMC),分别经佛波酯(Phorbol12-myristate13-acetate,PMA)和离子霉素(Ionomycin)非特异性刺激以及抗CD3单克隆抗体(CD3mAb)和白介素-2(IL-2)的特异性刺激,利用流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)检测CD3+CD56+NKT样细胞刺激前后的表达,以及细胞刺激活化后Th1型细胞因子IFN-γ和Th2型细胞因子IL-4的表达水平。 结果: 1.SLE患者外周血中CD3+CD56+NKT样细胞占淋巴细胞百分比显著低于正常对照组(1.45±0.37vs2.81±0.52),差异有统计学意义(P<0.01),而SLE疾病稳定组和疾病活动组之间没有显著性差异(1.53±0.44vs1.41±0.33,P>0.05)。 2.SLE患者与正常对照组外周血中CD3+CD56+NKT样细胞数量经两种方法刺激活化后表达均显著提高,与活化前相比差异有统计学意义(P<0.01),与佛波酯(PMA)和离子霉素(Ionomycin)的非特异性刺激相比,经抗CD3单克隆抗体(CD3mAb)和白介素-2(IL-2)的特异性刺激后NKT样细胞增殖能力更强,差异有统计学意义(P<0.01),而且经CD3mAb和IL-2特异性刺激后,正常对照组NKT样细胞增殖能力要强于SLE组,差异有统计学意义(16.73±2.44倍vs13.78±1.87倍,P<0.05)。 3.经抗CD3mAb+IL-2特异性刺激和PMA+Ionomycin的非特异性刺激后SLE患者与正常对照组外周血中CD3+CD56+NKT样细胞Th1型细胞因子IFN-γ的表达均显著高于刺激活化前,刺激活化后SLE组中表达IFN-γ的细胞要高于正常对照组,且经特异性刺激后SLE患者与正常对照组外周血中CD3+CD56+NKT样细胞Th1型细胞因子IFN-γ的表达显著高于非特异性刺激,差异有统计学意义(P<0.01),而两组中Th2型细胞因子IL-4在两种方法刺激下均几乎不表达。 结论: 1.SLE患者外周血中CD3+CD56+NKT样细胞表达比正常人明显减少,而且经细胞因子诱导刺激也没有正常对照组扩增快,说明NKT样细胞与SLE发生存在密切联系,而且其功能异常可能与SLE病情发展相关。 2.CD3+CD56+NKT样细胞能够在体外被抗CD3mAb和IL-2特异性刺激活化,大量增殖,在适当条件下可以用于CD3+CD56+NKT样细胞减少的SLE患者的治疗。 3.CD3+CD56+NKT样细胞经体外刺激活化后大量分泌Th1型细胞因子IFN-γ几乎不分泌Th2型细胞因子IL-4,说明在SLE患者中NKT样细胞功能的改变可能促进患者免疫应答向Th1诱导的体液免疫倾斜,通过分泌Th1型细胞因子IFN-γ来调节炎症免疫作用,而抑制Th2反应。