目的:本研究项目主要采用体外细胞培养模型研究了葫芦素B对于膀胱癌T24细胞的增殖、迁移和侵袭的影响,以及对T24细胞的凋亡和细胞周期的抑制作用和机制,以提供药物治疗膀胱癌的可行性的理论基础。方法:体外实验培养T24细胞,采用CCK8法观察葫芦素B对肿瘤细胞增殖的直接影响。细胞划痕法用于观察细胞迁移的影响。采用Transwell法检测了葫芦素B对膀胱癌T24细胞侵袭能力抑制的影响。流式细胞仪主要用于实时检测膀胱癌细胞的凋亡率和细胞周期的分布情况。Western-blot蛋白印迹法用于准确检测细胞凋亡和细胞周期过程中相关活性蛋白的表达水平。结果:使用CCK8法和细胞划痕法分别观察不同药物浓度(0、400、800、1000n M)的葫芦素B对T24细胞增殖和迁移的影响。结果表明葫芦素B在不同的时间段(24h、48h、72h)对于膀胱癌细胞的增殖和迁移发挥抑制作用,随着细胞中葫芦素B浓度的增加,细胞的增殖速率和平均迁移距离受到显著的抑制,这种作用是具有时间依赖性的。倒置荧光显微镜观察Hoechst33258染色后的细胞,实验组较对照组可明显观察到较多的凋亡小体和破裂的细胞核。Annexin-V-FITC/PI双重染色可直接检测的细胞的凋亡率,发现膀胱癌细胞的凋亡率随着实验中药物浓度的增加而升高(P<0.05)。用Western Blot结果表明实验组较对照组中的Caspase-3和Caspase-9蛋白均为高表达。实时荧光定量(RT-PCR)的结果显示,随着葫芦素B浓度的增加,Bcl-2的m RNA的表达明显下降,而Bax的m RNA的表达明显增加(P<0.05)。此外,我们进一步研究证实Bcl-2和Bax的蛋白表达与实验中RT-PCR的结果一致。流式细胞仪分析表明,与对照组相比,实验组细胞G1期下降,在G2期上升(P<0.05)。同时Western-blot分析显示CDC 25C和Cyclin B1的表达下调。结论:葫芦素B可显著抑制抑制细胞增殖、迁移和侵袭,并且促进T24细胞周期阻滞及细胞凋亡。