目的探讨Netrin-1的抗炎作用,及其受体UNC5B和下游分子PPARγ对糖尿病小鼠视网膜Müller细胞炎症反应的影响。方法C57 BL/6小鼠经高脂高糖饮食喂养,腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病(Diabetic mellitus,DM)模型。为研究内源性Netrin-1对糖尿病视网膜病变(Diabetic retinopathy,DR)的影响,设置4组进行实验,正常小鼠/DM小鼠右眼注射si-Netrin-1抑制Netrin-1表达(si-Netrin-1组/si-Netrin-1+DM组),左眼注射阴性对照抑制剂(si-NC组/si-NC+DM组)。为研究外源性Netrin-1对DR的影响,取30只小鼠随机分为三组:对照组、DM组、Netrin-1组(DM造模成功后1个月时玻璃体腔内注射Netrin-1溶液)。使用实时荧光定量PCR检测各组小鼠视网膜组织中炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)m RNA的表达。通过免疫荧光染色检测对照组、DM组、Netrin-1组Müller细胞和IL-6蛋白。为探究Netrin-1对高糖诱导的Müller细胞炎症反应的影响,设置5组进行实验,高糖组模拟体内高糖环境(DMEM完全培养基中添加30mmol/L葡萄糖),对照组(DMEM完全培养基中添加30mmol/L甘露醇)以排除葡萄糖高渗透压的影响,Netrin-1组(在高糖组培养基中添加外源性Netrin-1),si-Netrin-1组(高糖组培养基中添加Netrin-1 si RNA沉默内源性Netrin-1),Netrin-1阴性抑制组(高糖组培养基中添加阴性核苷酸抑制剂)。Netrin-1有多种受体,为探讨其是否通过UNC5B受体并调节下游PPARγ发挥作用,分3组进行实验,si-UNC5B组(Netrin-1组培养基中添加UNC5B si RNA沉默受体UNC5B),UNC5B阴性抑制组(Netrin-1组培养基中添加阴性核苷酸抑制剂),BADGE组(Netrin-1组培养基中添加PPARγ特异性拮抗剂BADGE)。48小时后利用Western blot和免疫荧光结合的方法检测Netrin-1、PPARγ、NF-B和IL-6表达水平。结果视网膜组织沉默Netrin-1后,IL-1β、IL-6、TNF-αm RNA表达升高(P<0.05)。注射Netrin-1溶液,IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白水平均降低(P<0.05);DM组IL-6荧光强度大于对照组,Netrin-1组可以减小其增大幅度。Müller细胞高糖组和对照组相比,Netrin-1蛋白表达轻度增加,PPARγ、NF-B、IL-6蛋白表达明显增加(P<0.05)。与高糖组相比,Netrin-1组PPARγ蛋白表达增加,NF-B、IL-6蛋白表达降低;si-Netrin-1组PPARγ蛋白表达降低,NF-B、IL-6蛋白表达增加(P<0.05)。si-UNC5B组与Netrin-1组相比,PPARγ蛋白表达降低,NF-B、IL-6蛋白表达增加(P<0.05)。BADGE组与Netrin-1组相比,NF-B、IL-6蛋白表达降低(P<0.05)。阴性对照均成立。结论Netrin-1可以降低DR中的炎症反应,可能是在Müller细胞中与其受体UNC5B结合涉及PPARγ/NF-B信号通路降低高糖诱导的炎症反应。