十字花科黑腐病菌hrp基因簇左侧序列基因的功能鉴定和表达调控分析

来源 :广西大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lioutao2009
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许多植物和动物病原菌利用Ⅲ型分泌系统(T3SS)运送毒力蛋白至寄主细胞中。植物病原菌的T3SS由hrp(hypersensitive response and pathogenicity genes)基因编码。hrp基因和其它一些致病相关基因共同存在于一个致病岛的结构中,即Hrp致病岛。十字花科黑腐病菌Xcc8004(Xanthomonas campestris pv.campestris str.8004)有一个长41.7-kb的Hrp致病岛,包含41个开放阅读框(ORF)。该致病岛是一个典型的三元结构:位于致病岛中心区的hrp基因簇、左侧翼的假定基因区段(HGR)和右侧翼的降解酶类基因区段(EGR)。HGR长7.4-kb,注释蛋白编码基因6个,全部为功能未知的假定基因。   本研究以Xcc8004 hrp基因簇左侧的十个基因为研究对象,利用AvrBs1这一报告系统,对其是否为Ⅲ型效应物进行了鉴定,结果发现了一个新的效应物基因XC2994。利用GUS报告系统,发现XC2994是一个受hrpG及hrpX正调控的基因,同时也发现XC2987、XC2989、XC2990、XC2998也受hrpG及hrpX正调控。RT-PCR结果显示,除XC2988以外,其它基因都受到hrpG及hrpX正调控。致病性检测结果表明,XC2994是一个致病性相关基因,而其它表型没有变化,其致病机制有待研究。XC2988、XC2990、XC2991、XC2998的突变体的致病力下降:XC2988的突变体影响胞外蛋白酶;XC2990、XC2991、XC2998的突变体影响细胞游动性;XC2991、XC2998还影响胞外多糖的产生。本研究还利用农杆菌介导瞬时表达系统,在20种十字花科植物上检测了XC2994是否为一个无毒基因。虽然没有直接证明XC2994是无毒基因,但发现了两个Xcc8004不致病的植物品种,为以后鉴定其它无毒基因奠定了基础。在此之前,本实验室在hrp基因簇左侧还发现了一个效应物基因XC2995,结合本实验结果,表明hrp基因簇左侧可能是一个效应物聚集区。XC2994、XC2995的G+C含量仅为56.9%及49.1%,明显低于基因组的平均G+C含量,显示了基因水平转移的特性。
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