目的:建立效率高的、灵敏的针对溶瘤2型单纯疱疹病毒（Oncolytic herpes simplex virus type 2,oHSV2）的荧光定量PCR方法,依据中国药典的方法学验证指导原则对该PCR方法进行初步的验证,并检测给药后小鼠肿瘤组织内粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte-macrophage colonystimulation factor,GM-CSF）的表达。方法:（1）分析oHSV2的全基因组序列,根据它的GM-CSF基因片段,登录Beacon Designer8.0软件设计一对特异性高的引物。提取前期已经重组好的阳性质粒pHG52d34.5CMVhGM-CSF,超微量分光光度计测定该质粒的浓度,并根据公式换算成拷贝数,将其梯度稀释为荧光定量PCR的模板。建立标准曲线,做该方法的特异性、敏感性和重复性试验。（2）采集捐献者的血液和尿液,与10³、10⁴、10^5.5、10^6.5 copies/μL pHG52d34.5CMVhGM-CSF混合后用QIAamp DNA Mini kit提取总DNA并进行SYBR Green real-time PCR反应,初步验证该方法。（3）裸鼠人恶性黑色素瘤细胞（A375）细胞系植瘤,待瘤子长到一定体积后瘤内给予oHSV2,分别于24 h、48 h、72 h、96 h针吸取样,并提取样本的RNA,反转录后进行PCR检测。结果:oHSV2最低检测限为10³ copies/μL,标准曲线方程:y=-3.283log（x）+40.328,R²可达0.998,批内及批间变异系数分别为0.357%¹.156%和1.06%³.35%,血液中预加的质粒的回收率为96.6%¹09.3%,尿液中预加的质粒的回收率为96.9%¹04.7%。24 h、48 h、72 h、96 h的肿瘤样本可以检测到GM-CSF的表达,96 h的样本结果低于检测下限。结论:（1）建立了针对oHSV2的荧光定量PCR检测方法,可以为后续的临床试验提供理论以及技术上的支持。（2）检测oHSV2的PCR方法通过验证（3）该方法能够检测到给药后小鼠肿瘤组织内GM-CSF的表达情况。