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将含缺失跨膜区M2蛋白重组质粒pGEXsM2的大肠杆菌,用终浓度为0.6mmol/L的IPTG在37℃下诱导表达,获得可溶性表达的融合蛋白;利用M2特异性单克隆抗体14C2对表达蛋白进行Western blot检测,结果在35KD处有一条特异性条带,表明表达的重组M2蛋白具有免疫反应活性;表达产物经过GST亲和吸附柱进行纯化,获得了纯化的目的蛋白,使用分光光度计确定纯化后M2蛋白的浓度为5.6mg/ml。利用亲和层析柱纯化表达产物后做为抗原包被ELISA板,建立检测禽流感M2抗体的间接ELISA检测方法。结果表明抗原的最佳包被浓度50μg/ml,被检血清的最佳稀释度为1:200,酶标二抗的最佳稀释度为1:20000;特异性试验表明M2抗原与ND、IB、IBD和MD的标准阳性血清没有反应性;将M2高免阳性血清稀释至1:1600倍后仍能检测到M2抗体,说明建立的ELISA检测方法敏感性较好。将纯化的M2蛋白与佐剂乳化预制成亚单位疫苗。65只SPF鸡分为4组:M2免疫组、HA免疫组、HA+M2联合免疫组及PBS对照组,M2免疫组和HA免疫组免疫目的蛋白剂量为30μg/羽,联合免疫组免疫目的蛋白剂量HA蛋白为30μg/羽M2蛋白为30μg/羽,一免2周后加强免疫一次。免疫前及免疫后每周采血,分离血清,检测HA和M2抗体,二免3周后取30只鸡使用致死剂量的H5N1亚型禽流感病毒攻击,25只鸡使用致死剂量的H7N1亚型禽流感病毒攻击,其余鸡用于监测产生抗体的动态变化。结果表明M2免疫组和联合免疫组在免疫后2周都产生了M2的ELISA抗体,二免疫后4周抗体水平达最高M2免疫组为25600,联合免疫组为51200,二免8周仍能检测到M2抗体为6400。联合免疫组和HA免疫组经免疫后均产生HI特异性抗体,免疫1周后检测到HI抗体,加强免疫3周后两免疫组HI抗体水平均达到最高水平26.8并保持2周以上,随之缓慢下降,而两免疫组HI抗体水平没有明显的差别。H5N1亚型禽流感病毒攻击,联合免疫组和HA免疫组具有100%的保护力,M2免疫组具有20%的保护力,而对照组全部死亡;H7N1亚型禽流感病毒攻击,联合免疫组和M2免疫组都有10%的保护力,对照组则全部死亡。