一、研究背景自20世纪90年代,全球性的新军事变革蓬勃兴起,现代多发的局部战争中,由于作战防护装备精良及救治措施的及时有效,伤员的死亡率大大降低,但爆炸所致的软组织伤仍是导致部队减员、战斗力削弱的重要原因。爆炸所引起的冲击波及热气浪对人体组织可造成严重的损伤,可引起组织缺损,并残留异物,引起感染。封闭负压引流(vacuum sealing drainage,VSD)是一种新型创面治疗技术,具有价格低廉、操作相对简单、显著降低医护人员工作量、可有效控制和减轻感染等优点,但目前VSD用于战场中的爆炸伤研究比较少。本课题模拟战场中爆炸所致的软组织创伤在前方医院进行彻底清创,然后对伤口进行封闭负压引流治疗,在术后3天、6天观察创面的细菌数量、胶原和VEGF含量的变化。进一步探讨VSD对爆炸所致的软组织创伤的愈合作用,为现代战争中爆炸所致的软组织创伤治疗提供一个科学和有效的方法。二、研究目的观察封闭负压引流(vacuum sealing drainage,VSD)对软组织爆炸创面早期愈合的影响,为战场中所致的爆炸伤初级救治提供新的思路。同时研制便携式手动负压吸引装置。三、研究内容和方法1研制便携式手动负压吸引装置研发便携式手动负压引流装置,设计上要求体积小、携带方便,不依赖电源,操作简单且维持负压效果好,由专业厂家按设计要求制作。产品用于临床安全可靠。2创面细菌计数实验组和对照组于治疗前、治疗后3d和6d分别选取创面表面不同的5个位置切取约0.1cm×0.1cm×0.1cm的组织,称重后用眼科剪刀剪碎,加入99倍重量的无菌生理盐水,用玻璃匀浆器匀浆。将匀浆液按10倍比例稀释(10×,100×,1000×…),取100μL稀释液接种到10cm的血琼脂糖平板上,37℃孵育24h,计数平板上的细菌菌落数。每克组织内的细菌数=菌落数×103×稀释倍数。3 Masson染色的病理组织学制备:在治疗3d和6d后分别对每个创面进行矢状面病理取材,将所取的新鲜标本置于体积分数10%的中性甲醛溶液(0.1mol/L,PH=7.4)中固定3d。固定好之后取材,逐级脱水至二甲苯透明,石蜡包埋,切片后脱蜡至水,进行Masson氏染色。光学显微镜观察,用Image-Pro plus6.0图像软件对Masson染色的肉芽组织中胶原(绿色)含量进行扫描测定,即:胶原含量%=胶原面积/总面积×100%。4 VEGF蛋白质印迹分析各组治疗3d和6d后在创面下部切取约100mg的组织,4℃预冷的PBS漂洗新鲜组织两遍后,将组织充分研磨后加入0.5ml的裂解液于冰上冰浴30min。4℃,14000g离心20min,取上清即为总蛋白。采用BCA法对蛋白样品进行定量,8%SDS-PAGE凝胶电泳分离后,将蛋白转至PVDF膜上,封闭2h,然后加入一抗,4°C过夜;次日加入二抗37℃孵育2h;用增强化学发光法检测目的蛋白,X光片的曝光时间视实验效果而定,灰度值使用Image-Pro plus6.0软件扫描测定。5统计学处理数据统计采用SPSS16.0统计软件进行分析,测定结果均以均数标准差( x±SD)表示,组间比较采用配对t检验,P值<0.05为差异显著有统计学意义。四、结果1便携式负压引流装置成品用于临床及动物实验,效果良好,且已申请专利。2可视下创面的改变爆炸后创面大小在85～105cm2之间,创面烧焦,污染严重,周边皮缘2.5cm范围内水肿,皮肤呈哆开状,最大哆开距离5cm,伤口有明显的出血,爆炸后在创面周边皮肤形成清晰的红色晕圈。治疗3d后,实验组创面有大量的颗粒状肉芽组织,创面清洁,无异味,触之易出血,无明显的水肿和继发性坏死组织;对照组创面表面有灰色的继发性坏死组织和乳黄色黏稠状渗出物,创面有腥臭味,创面周围的皮肤组织水肿,并有些红。治疗6d后,实验组创面颗粒状肉芽组织丰富,色泽鲜红,血运丰富,创面清洁,无异味,创面深度明显减小,无水肿和继发性坏死组织,周围皮肤组织正常;对照组创面表面有大量黑色的继发性坏死组织和乳黄色黏稠状渗出物,肌肉组织形成裂痕,创面恶臭,明显感染和水肿。3细菌学检测的结果爆炸后3h和彻底清创后在实验组和对照组间细菌数无明显差异(P>0.05),治疗3d后和治疗6d后在实验组和对照组间细菌数差异极显著(P <0.01)。实验组始终没有达到感染临界值105,治疗3d后细菌数达到104,但治疗6d后细菌数有所下降。对照组3d后细菌数就已超过感染临界值10~5,6d后的细菌数竟达到10~9,表面创面明显发生感染。4 Masson染色的结果治疗3d后,实验组和对照组创面中新生肉芽组织的胶原含量有显著性差异(P<0.01),实验组的胶原合成量明显高于对照组的量;治疗6d后,实验组和对照组的胶原含量差异极显著(P<0.01)。随着治疗时间的推移,实验组和对照组新生肉芽组织的胶原含量的差异越来越明显。5蛋白质印迹分析治疗后,创面中的VEGF含量随时间的增加不断积累,A组与B组的变化趋势一致,治疗3d和6d后,A组VEGF的含量明显高于B组的含量,各检测时间点差异显著,有统计学意义。五、结论1、由VSD创面伤口的可视观察与细菌学比较实验均证实爆炸创面早期运用VSD疗法,可抑制细菌增殖,降低感染率。2、通过Masson染色的结果得出,VSD可促进创面中新生肉芽组织的胶原含量上升。3、由VEGF蛋白质印迹分析实验证实实验组的胶原含量明显高于对照组,并随着时间推移,实验组和对照组新生肉芽组织的胶原含量的差异越来越明显。4、VSD在软组织爆炸创面修复过程中具有广阔的应用前景。