【摘 要】
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番茄(Solanum lycopersicum)与叶霉菌(Cladosporium fulvum)的互作符合“基因对基因”假说,是研究“基因对基因”假说的模式系统。利用该系统,相继在番茄与叶霉菌中克隆了多
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番茄(Solanum lycopersicum)与叶霉菌(Cladosporium fulvum)的互作符合“基因对基因”假说,是研究“基因对基因”假说的模式系统。利用该系统,相继在番茄与叶霉菌中克隆了多个抗病基因与无毒基因。Cf-4E与Avr4E是其中的一对互补基因对。与其它基因对如Cf-4/Avr4、Cf-9/Avr9和Cf2/Avr2相比,目前对Cf-4E与Avr4E互作的机制及信号途径研究相对较少。本项目以Cf-4E与Avr4E为研究材料,开展了如下研究:(1)因为本项目中需要大量筛选转基因植株后代,所以需要一种高通量筛选转基因植株的方法,因此开展了转基因植物后代鉴定的优化。将未消毒的T1代转基因种子,在非无菌条件下,直接播于含有1/2MS和相应抗生素的滤纸上,7-9 d后,分离株系在抗生素的作用下出现表型差异,该方法可方便快捷的从杂合体中筛选出下一代阳性转基因植株。(2)利用本实验室已有的转Avr4E的本氏烟材料和转Cf-4E的番茄材料,将构建好的pER8::Cf-4E与pER8::Avr4E诱导型表达载体分别遗传转化相应宿主,共获得了 101个转基因本氏烟株系。在被雌二醇诱导检测的28个以Avr4E12-3-1-T3为背景的T1代转基因株系中,有10株出现过敏性坏死(hypersensitive response,HR),它们是 1、2、5、6、7、11、14、16、32 和 34。将 T1 代种子经抗生素筛选,卡平方值计算,确定以Avr4E12-3-1-T3为背景的转基因株系6和以Avr4E3-1-2-T3为背景的转基因株系26是单拷贝株系,目前已获得这两个株系的T3代种子。对番茄的遗传转化工作尚在进行中。
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