【摘 要】
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目的:研究苦参碱对HERG(Human ether-à-go-go-reline)钾通道的影响;探讨苦参碱对As2O3所引起的HERG通道蛋白转运缺陷的拯救作用及其分子机制。 方法:(1)应用Western blot法
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目的:研究苦参碱对HERG(Human ether-à-go-go-reline)钾通道的影响;探讨苦参碱对As2O3所引起的HERG通道蛋白转运缺陷的拯救作用及其分子机制。 方法:(1)应用Western blot法研究HERG-HEK细胞孵育As2O3、苦参碱后对HERG通道蛋白及Sp1蛋白表达的影响;(2)应用实时定量RT-PCR法检测HERG-HEK细胞给药前后HERG基因和其转录因子Sp1的表达变化;(3)应用全细胞膜片钳技术研究在HERG-HEK细胞中共同孵育As2O3和苦参碱后对HERG通道功能的影响。 结果:(1)Western blot法显示5μmol/L As2O3孵育24h后对HERG通道蛋白有明显的抑制作用(P<0.05),1μmol/L苦参碱孵育24h后能够拯救5μmol/L As2O3引起的HERG通道蛋白运输缺陷(P<0.05);(2)实时定量RT-PCR显示1μmol/L苦参碱孵育24h后可以上调HERG及Sp1的mRNA水平(P<0.05);(3)Western blot法显示1μmol/L苦参碱孵育24h后可以增加转录因子Sp1在HERG-HEK细胞内的表达(P<0.01)。(4)Western blot法显示5μmol/LAs2O3孵育24h后能够抑制Sp1在HERG-HEK细胞内的表达(P<0.05),当5μmol/LAs2O3与1μmol/L苦参碱共孵育24h后能够增加As2O3引起的Sp1减少(P<0.05);(5)膜片钳显示5μmol/L As2O3孵育24h后HERG尾电流显著降低,抑制率达54.7%,而1μmol/L苦参碱与As2O3共孵育24h后能够增加受抑制的电流,拯救率为31.5%。 结论:苦参碱能够拯救As2O3所引起的HERG通道蛋白转运缺陷,其机制可能是通过调节转录因子Sp1途径实现的。
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