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目的：研究无血清培养基悬浮培养MCF-7和MDA-MB-231细胞系，筛选出细胞系中的干细胞相关亚群，并研究乳腺癌干细胞相关基因在2种乳腺癌细胞系及干细胞亚群中的表达差异。 方法：本实验利用有血清贴壁和无血清悬浮这两种体外细胞培养方法，培养MCF-7和MDA-MB-231细胞，扩增出贴壁细胞和悬浮细胞球两种肿瘤细胞。通过无血清悬浮培养筛选出乳腺癌细胞系中肿瘤干细胞相关亚群。流式细胞仪检测MCF-7贴壁及悬浮球细胞、MDA-MB-231贴壁及悬浮球细胞中CD44+CD24-、CD133+表型细胞比例的变化。RT-PCR检测MCF-7贴壁及悬浮球细胞，MDA-MB-231贴壁及悬浮球细胞中乳腺癌干细胞相关基因CD44、CD24、CD133、ALDH3A1、EPCAM、CXCR4、ABCG2、PROCR的表达状况。 结果：1.细胞微球体培养观察：细胞在干细胞培养基中培养，大多呈悬浮生长，培养第三天就可见由3-10个细胞形成的微球体，培养6-7d后形成许多约100μm的微球体。收集微球体细胞消化后进行第二代微球体培养，形成微球体的速度较第一代稍快，且微球体的体积稍大；可连续传代5次，仍有微球体形成。 2.细胞微球体形成效率观察：MDA-MB-231细胞微球体形成效率为(3.21±0.20)％，高于MCF-7细胞(2.14±0.30)％，P<0.05。 3.流式细胞仪检测细胞中CD44+CD24-/low和CD133+表型比例：MCF-7微球体细胞的CD44+CD24-/low比例为(4.16±0.45％)，高于其贴壁培养细胞(0.80％±0.50％)，P<0.05；MCF-7微球体细胞的CD133+比例为(6.13％±2.69％)，其贴壁培养细胞为(0.83％±0.31％)，P>0.05。MDA-MB-231微球体细胞的CD44+CD24-/low比例为(12.10％±5.21％)，低于其贴壁培养细胞(86.27％±5.44％)，P<0.05；MDA-MB-231微球体细胞的CD133+比例为(56.30％±1.60％)，明显高于其贴壁培养细胞(0.97％±0.96％)，P<0.05。 4.RT-PCR检测乳腺癌干细胞相关基因表达状况：MCF-7微球体细胞较其贴壁细胞高表达CD44、ABCG2、EPCAM mRNA，分别上调了约1.2、2.6、4.3倍，P<0.05；PROCR mRNA下调了0.4倍，P<0.05；CD24、CD133、ALDH3A1、CXCR4 mRNA表达差异无统计学意义。MDA-MB-231微球体细胞较其贴壁细胞高表达CD24、CD133、ABCG2、EPCAM、CXCR4、ALDH3A1 mRNA，分别上调了约3.2、13.2、14.6、2、3.2、4.4倍，P<0.05；CD44、PROCR mRNA分别下调了0.5、0.4倍，P<0.05。MCF-7微球体和MDA-MB-231微球体细胞CD44、CD24、CD133、ALDH3A1、EpCAM、CXCR4mRNA的表达存在差异，P<0.05。 结论：1.MCF-7、MDA-MB-231细胞可以通过微球体培养富集肿瘤干细胞。 2.MDA-MB-231细胞的微球体形成效率略高于MCF-7细胞。 3.MCF-7微球体富集了CD44+CD24-/low表型的肿瘤干细胞，MDA-MB-231富集了CD133+表型的肿瘤干细胞。 4.两种乳腺癌细胞系的微球体细胞分别较其较贴壁细胞的乳腺癌干细胞相关基因表达部分存在差异。 5.两种乳腺癌细胞系微球体细胞的部分乳腺癌干细胞相关基因的表达存在差异，推断不同分子亚型的乳腺癌干细胞的来源不同。