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重金属难以降解,可以在生物体内长期积累,在极其微量的情况下也可能产生严重后果。重金属通过食物链沉积到人和动物体后,可引起各种疾病,带来的危害甚至能遗传到下一代,严重危害了人类和动物的健康。目前,生态环境都不同程度受到重金属的污染。因此重金属检测在环境、农产品残留监测中非常重要。本研究旨在制备能稳定分泌高亲和力、高特异性抗重金属铜和抗重金属镉的单克隆抗体,以单克隆抗体为基础建立检测铜离子和镉离子的免疫分析方法。将重金属铜离子、镉离子通过双功能螯合剂与血蓝蛋白偶联制备免疫抗原,与牛血清白蛋白偶联制备检测抗原。免疫6-8周龄BALB/c小鼠后通过杂交瘤技术建立稳定分泌高亲和力抗重金属铜和抗重金属镉的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,间接ELISA法测定效价,非竞争ELISA测定亲和力,间接竞争ELISA法测定抗体的特异性。通过体内法大量制备并纯化单克隆抗体。采用矩阵实验确定抗原抗体的最佳工作浓度,评价封闭物、封闭时间等因素的影响,确定酶联免疫吸附分析的最佳工作参数,建立定量测定金属离子的间接竞争ELISA方法。结果选用双功能螯合剂1-(4-Isothiocyanobenzyl) ethylenediamine N,N,N’,N’-tetraacetic acid (ITCBE)、1-(4-aminobenzyl) ethylenediamine N,N,N’,N’-tetraacetic acid (Aminobenzyl-EDTA)、1,4,8,11-Tetraazacyclotetradecane-1,4,8,11-tetraacetic acid tetrahydrochloride tetrahydrate (TETA)、S-2-(4-isothiocyanatobenzyl)-1,4,7,10- tetraazacyclododecane-1,4,7, 10-tetraacetic acid (p-SCN-Bn-DOTA)成功制备了完全抗原包括免疫抗原Cu-ITCBE-KLH、Cu-TETA-KLH、Cu-p-SCN-Bn-DOTA-KLH、Cd-ITCBE-KLH、Cd-Aminobenzyl-EDTA-KLH。检测抗原Cu-ITCBE-BSA、ITCBE-BSA;Cu-TETA-BSA、TETA-BSA;Cu-p-SCN-Bn-DOTA-BSA、p-SCN-Bn-DOTA-BSA ; Cd-ITCBE-BSA、ITCBE-BSA ; Cd-Aminobenzyl-EDTA-BSA、Aminobenzyl-EDTA-BSA。并通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法、紫外分析及抗原中金属离子含量的检测对完全抗原进行了定性和定量分析,并对完全抗原进行了免疫检测表明Cu-ITCBE-KLH、Cu-p-SCN-Bn-DOTA-KLH、Cd-Aminobenzyl-EDTA-KLH适合用于免疫及后续的抗体制备。免疫6-8周龄BALB/c小鼠后通过杂交瘤技术建立了4株能稳定分泌抗铜单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中B2、F4特异性及亲和力高,建立了3株能稳定分泌抗镉单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中A3特异性及亲和力高。获得的单克隆抗体B2、F4、A3均为IgG1亚类。抗铜单克隆抗体B2、F4的亲和力常数分别为4.69×109、9.63×109 L/mol;抗镉单克隆抗体A3的亲和力常数为3.27×109 L/mol。抗体F4和A3的IC50分别为0.39 mg/L和8.4μg/L。建立了检测铜和镉的竞争ELISA方法,铜抗原的最佳工作浓度为0.5μg/mL,镉抗原的最佳工作浓度为1.0μg/mL,反应条件为检测抗原4℃包被过夜,兔血清37℃封闭1.5 h,酶标二抗37℃作用1 h,底物37℃反应10 min。铜和镉的最低检出浓度分别为0.003 mg/L和0.051μg/L;自来水中铜标准液的添加回收率为89.9%-102.6%,镉标准液的添加回收率为90.5%-104.4%。表明重金属铜、镉单克隆抗体F4和A3能用于实验室水样的重金属铜和镉含量的检测。