【摘 要】
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该研究利用PCR技术钓取了恶性疟原虫海南株(FCC1/HN)谷氨酸脱氢酶编码基因,克隆入pGEX-4T-1表达载体,测定的序列与恶性疟原虫Thailand株GDH基因序列进行比较,其推导的氨基酸
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该研究利用PCR技术钓取了恶性疟原虫海南株(FCC1/HN)谷氨酸脱氢酶编码基因,克隆入pGEX-4T-1表达载体,测定的序列与恶性疟原虫Thailand株GDH基因序列进行比较,其推导的氨基酸序列与不同物种的GDH序列进行同源性分析,以探讨恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶(GDHpf)独特的理化、生物学及酶学特性的分子机制.并在大肠杆菌BL21中进行了诱导表达,纯化重组蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,运用ELISA、Western-blot进行抗原性分析,为下一步筛选单抗用于GDH免疫胶体金诊断试剂(GICA)盒的研制奠定基础.结果显示,利用PCR技术成功地钓取了编码中国恶性疟原虫海南株(FCC1/HN)谷氨酸脱氢酶的基因序列.将GDHpf基因克隆到pGEX-4T-1表达质粒,经PCR、限制性酶切分析等鉴定,构建了pGEX-GDH重组表达质粒,首次测定了编码中国恶性疟原虫海南株(FCC1/HN)谷氨酸脱氢酶编码基因的全序列,大小为1413bp,无内含子.恶性疟原虫海南株GDH基因与Thailand株GDH基因相比,两者同源性高达99.86﹪,仅存在2个点突变,且均为同义突变,两者推导的氨基酸序列完全相同,说明该基因在不同的恶性疟原虫株之间高度保守.同源性分析结果表明,恶性疟原虫海南株GDH氨基酸序列与人的GDH同工酶、蓝氏贾第鞭毛虫、克鲁氏锥虫和细菌GDH相比,同源性较低,即使与BLAST检索出的具有最高同源性的蓝氏贾第鞭毛虫相比,也仅有57.90﹪的氨基酸残基相同,因此,疟原虫GDH明显不同于其它生物GDH.
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