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研究背景和目的结直肠癌是最常见的消化道肿瘤之一,具有较高的发病率和死亡率,严重威胁着人类的生命健康。多数癌患者在治疗前已经出现微转移,转移是造成结直肠癌病人死亡的主要原因,据临床统计,一半以上的结直肠癌病人死于转移及相关的并发症。近年来,已有研究证实FZD1在肿瘤中高表达,并提示FZD1可能与肿瘤转移有关。然而对于FZD1在结直肠癌中的作用机制尚未明确。本课题旨在探讨FZD1在结直肠癌发生、发展和侵袭转移过程中的作用及分子机制。作为Frizzled家族成员,FZD1是Wnt信号通路中的受体蛋白,参与Wnt信号通路的调控。FZD1的保守区域KTXXXW能与Dvl蛋白的PDZ结构域特异性结合,从而调控Wnt信号通路,包括经典Wnt/β-catenin信号通路和平面细胞极性通路(PCP通路,属于非经典Wnt信号通路)。PCP通路与细胞迁移、运动及细胞极性调控密切相关,已有研究表明,与FZD1结构相似性达75%的FZD2、FZD7参与的调节PCP通路,并且FZD1在结直肠癌中在结直肠癌微环境中呈梯度性表达。上述结果提示,FZD1可能通过调控PCP等信号通路参与CRC的发生和演进。然而,FZD1在结直肠癌中的表达及具体的作用机制尚不清楚。因此,本课题拟围绕这些问题展开的相应的深入研究。研究方法1.利用公共数据库、Real-Time PCR、Western bolt及免疫组化法分析、检测FZD1在结直肠癌中的表达情况及与其表达与临床病理参数之间的关系;2.利用平板克隆实验、MTT试验、裸鼠皮下成瘤实验检测FZD1过表达和被干3.利用三维培养实验、Transwell小室侵袭实验、划痕愈合实验、原位种植实验检测FZD1过表达和被干扰对结直肠癌细胞迁移侵袭能力的影响;4.利用公共数据库、Western blot等分子生物学实验,分子并探讨FZD1调控结直肠癌发生、侵袭转移的分子机制。5.利用免疫双荧光标记cortactin和F-Actin,观察FZD1过表达和被干扰对侵袭性伪足的形态和数量变化的影响;结果1.FZD1在结直肠癌组织中表达高于癌旁组织,在结直肠癌细胞株中高表达于正常肠粘膜细胞;2.FZD1过表达能够促进结直肠癌细胞增殖、侵袭转移的能力;FZD1被干扰能够抑制结直肠癌细胞增殖、侵袭转移的能力;3.FZD1表达上调调控Wnt/β-catenin、PCP信号通路的活性及下游的靶基因,调节侵袭性伪足的形成。结论1.FZD1在结直肠癌组织中的表达上调,并与结直肠癌患者的预后密切先关;2.FZD1表达上调通过调控经典Wnt/β-catenin PCP信号通路的活性及下游的靶基因,调节侵袭性伪足的形成,进而参与调节结直肠癌细胞的增殖,侵袭和转移。