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目的 肺癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，近年来肺癌死亡率显著增高，特别是与空气污染、吸烟等有关的城市男性肺癌死亡率达38.08/10万，严重地威胁人类健康。非小细胞肺癌(NSCLC)占全部肺肿瘤的75％-80％。对其分子病理学的阐释为临床早期诊断和防治肺癌提供了理论依据。 肺癌的发生是一个多基因参与、多阶段发展的复杂过程，是环境因素与基因交互作用的结果。机体暴露于环境危险因素而导致DNA损伤，促使癌基因激活和/或抑癌基因失活而形成恶性肿瘤。脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad，FHIT)基因是近年克隆的一个新的候选抑癌基因，国内、外有关其蛋白产物在肺癌中表达情况的研究报道得不多，大样本的研究结果更少，而且结论具有争议性，对癌前病变区的研究结果目前国内尚无报道。本实验通过特异的抗FHIT蛋白抗体检测102例非小细胞肺癌及30例癌旁支气管不典型增生区FHIT蛋白的表达情况，从分子流行病学角度探讨FHIT蛋白与非小细胞肺癌临床病理特征的关系，采获取其与非小细胞肺癌发生发展的关系。我们同时应用抗PCNA特异性抗体进行免疫组织化学染色，来反映FHIT蛋白变化与细胞增殖的关系，并有助于对癌前病变区的观察。 材料与方法 1．组织标本： 共102例患者标本，其中随机收集1999年11月-2000年2月辽宁省肿瘤医院手术切除的非小细胞肺癌组织的石蜡标本76例，每例都包括肺癌组织、癌旁组织和远扬正常肺组织，HE染色后挑选出癌旁有支气管不典型增生者30例。另外26例标本为2002年中国医科大学附属第一临床学院手术切除的新鲜肺癌组织及相应的正常肺组织，每例标本分成两部分，一部分置于一70℃冰冻保存，另外一部分中性福尔马林固定后制成石蜡块。全部患者均无术前放、化疗治疗史。 2．方法： 2．二 采用键菌素抗生物素蛋白一过氧化物酶免疫组化法门S－P法L检测102例非小细胞肺癌组织、相应正常肺组织以及其中30例含癌前病变的癌分组织的石蜡标本中FHIT蛋白和PCNA的表达。结果判定：每张切片在光镜下随机选取5个高倍视野，每个视野计数100个瘤（异型增生）细胞。观察阳性细胞染色强度，计数阳性细胞百分比。综合计分：无染色为0分，淡黄色和黄色为二分，棕黄色为2分；＜10％为o分，10畅一50％为二分，＞50％为2分，两项合计乘积0分为阴性（－＊1分一2分为弱阳性（十厂4分为强阳性（n人我们规定FHIT染色阴性为失表达。PCNA染色结果通过物增殖指数＊）来判定：PI＝PCNA阳性细胞核或00。 2．2 免疫印迹法：取在液氮中冻存的肺癌及正常的肺组织0．125 cm’大小各一块复融后分别加人预冷并含蛋白酶抑制剂的裂解缓冲浪 500 gi，匀浆、超声振荡破碎细胞，混悬冰上静置 30min后离心＊，000r／minJ）取上清，用酚试剂法测蛋白质浓度。用含sns的样品缓冲液调整各样品总蛋白浓度为sing／wt＊加热 smin后上样，每泳道加样品 75po。采用 15％SDS－PAGE凝胶电泳刀．l＆电流下电泳 3一再小时，根据 mter位置，切取相应的凝胶，电转膜后将 PVDF膜与一抗杂交，4℃孵育过夜（用 1％阴A按1：例稀释FfllT一抗人二抗为碱性磷酸酶标记的羊抗 ·2·兔免疫血清（用 1％ BSAI：l删稀释入室温孵育 2 ，J’时，BC皿Ngr显色3巧。结果判定：在Inamer的15KDa－20KI）a条带“之间出现特异的条带，用地机图像分析系统测定发度值，来判断FHIT蛋白相对含量。 3．统计学处理：采用 Se for Windowslo．0统计分析软件，免疫组化结果进行护检验，Kae－Met。法分析生存数据，饲一rallx检验差异性，用Cox模型进行生存时间资料的多因素分析。Western bo结果的发度值蛐癌组和正常组进行配对t检验。P＜0．历为有统计学意义。 实验结果 1．免疫组织化学结果 1．IFllll’阳性染色定位及不同部位表达槽况 Fll－x＊r阳性染色定位于正常支气管粘膜上皮细胞、支气管腺体J型肺泡细胞、巨噬细胞及肺癌细胞胞浆，呈黄或棕黄色。FHIT蛋白在NSCLC组织中失表达的发生率较高：69．6％（7／102人明显高于在远癌正常肺组织中失表达的发生率：9．8％门／1：＊二者之间差异有显著性，P＜o．m＊ 1．2 非小细胞肺癌组织中FHIT蛋白的失表达与临床病理特征的关系 ＊）F’lllT蛋白在鳞癌中失表达的发生率为79％（45／57h腺g为53％（18／34L腺鳞癌66％N／9人大细胞癌11％（2／2），腺癌与群场间差异显著，P＝0．of。p）Fllll’蛋白在不同临床分期的失表达率：I＋11期 83％05／42X皿十IV期 60％门6／60人 P＜0．05。p）在腺癌中，中低孤岛细胞Fllll’蛋白失表达率高于高分化癌细胞，且差异有显著性，P ＝＝0．0；而对于鳞癌，不同分化程度之间差别无统计学意义（P＝＝0．121人NV 蛋白在有吸烟 ·3·史患者失表达率明显高于无吸烟史患者（P＝0．001人O）FHIT蛋白表达水平在取自不同年龄、性别的患者