目的：本课题在便秘大鼠模型建立后，进行恢复性饲养，通过观察其结肠壁内Ca{alf司质细胞数量、形态以及NOS、SP免疫反应性的变化，了解停用大黄后Caial间质细胞以及NOS、SP阳性反应细胞的恢复情况，探讨Cajal间质细胞、NOS、SP阳性反应细胞在慢传输型便秘中的可逆转性。 方法： 1、动物分组：选取健康Wistar大鼠120只，雌雄各半，按照完全随机的方法进行分组：便秘一组、便秘二组及对照组，各40只，分组后组间体重、性别无显著性差异。 2、动物处理：便秘一组及便秘二组采用大黄浸液灌胃，首日剂量为800mg/kg(生粉)，此后每日剂量在前一日基础上增加200mg/kg(生粉)，直至出现半数大鼠粪便变稀，保持剂量至80％的大鼠稀便消失，继续加量给药，至又有半数大鼠粪便变稀，如此程序循环3次，待便秘一组及便秘二组第三次80％的大鼠稀便消失一周后停止建模。然后便秘一组继续以维持量大黄灌胃，便秘二组以同等体积蒸馏水灌胃恢复性饲养，时间为1个月。对照组自实验开始以同等体积蒸馏水灌胃。 3、标本取材：恢复性饲养1个月后分别选取便秘一组、便秘二组及对照组大鼠各20只，切取横结肠中段肠壁组织二块，分别石蜡包埋和环氧树脂包埋。石蜡包埋组织切片后经常规HE染色、NOS、SP及c-kit免疫组织化学染色。光镜下观察Cajal间质细胞、肠神经丛和免疫反应阳性细胞的改变。环氧树脂包埋标本超薄切片，饱和醋酸铀和柠檬酸铅染色，透射电镜下观察神经节细胞及Cajal间质细胞的胞内形态学变化。 4、半定量分析：根据NOS、SP免疫反应阳性神经元胞体和纤维的分布密度及活动性强弱，做相对半定量比较。所有视野未见阳性细胞为(-)；有少数阳性细胞为(+)，染色为淡黄色；阳性细胞较多见为(++)，染色为棕黄色；阳性细胞多见为(+++)，染色为棕褐色。 5、图像分析：在CMIAS系列多功能病理图像分析系统下，每组选5例染色良好的切片，在显微镜物镜放大10倍下观察，以肌间丛为中心每张切片随机选取5个视野，共25个视野摄入计算机(分辨率为800×600)，测量每个视野阳性染色区域的表面积密度，即面密度。最后计算每组的平均值。并用尼康光镜照相机拍摄典型视野。 6、统计分析：本实验资料数据采用x±s表示，应用SPSS10.0统计软件，选用单因素方差分析进行统计分析，检验水准a=0.05。半定量分析结果采用Excel编程统计，检验方法选用成组设计多个样本比较的秩和检验(Kmskal-Wallis法)及多个样本两两比较的秩和检验(Nemenyi法)，检验水准a=0.05。 结果： 1、肠道HF染色：对照组大鼠肠道切片HE巳染色未发现病变，便秘一组大鼠肠道切片HE巳染色可见粘膜慢性炎症改变，便秘二组大鼠肠道切片HE巳染色可见粘膜慢性炎症改变较便秘一组大鼠减轻。 2、SP、NOS免疫组织化学结果： 2.1 SP 便秘一组免疫反应性较对照组明显降低(P<0.01)；便秘二组免疫反应性较便秘一组明显增高(P<0.01)，但低于对照组(P<0.0 1)。 2.2 NOS 便秘一组免疫反应性较对照组明显增高(P<0.01)；便秘二组免疫反应性较便秘一组明显降低(P<0.01)，但高于对照组(P<0.01)。 3、对SP、NOS免疫组织化学图像分析的结果与半定量分析一致。 4、c-kit免疫组织化学图像分析： 便秘一组免疫反应性较对照组明显降低(P<0.01)；便秘二组免疫反应性较对照组明显降低(P<0.01)；便秘二组免疫反应性较便秘一组稍有升高(P>0.05)。 5、电镜： 对照组：Caial间质细胞常见，胞质内有丰富的线粒体、粗面内质网及膜内陷空泡，与平滑肌细胞有缝隙连接；可见正常神经元，其胞质内可见丰富的粗面内质网、核糖体。 便秘一组：未找到Caial间质细胞。神经元有明显的退行性改变。 便秘二组：可找到少量Caial间质细胞，神经髓索、平滑肌细胞、神经胶质细胞退行性变有所恢复。 结论： 1、长期应用大黄导致的慢传输型便秘大鼠模型，可出现粘膜慢性炎症改变，固有膜水肿，肌层胶原纤维增生；肌间神经丛神经细胞空泡变性、减少。停用大黄恢复性饲养1个月后，粘膜炎症改变出现一定程度恢复。 2、长期应用大黄等葸醌类泻剂对肠道神经系统有明显的损害作用，肠道NOS反应性升高，SP反应性降低；停用大黄恢复性饲养1个月后肠道神经递质出现恢复倾向。 3、长期应用大黄导致的慢传输型便秘大鼠模型，出现Cajal间质细胞的胞内形态学变化，且数目减少，c-kit免疫反应性明显降低；停用大黄恢复性饲养1个月后Cajal间质细胞的数量增加，细胞内形态学改变有所恢复，c-kit免疫反应性升高。