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目的研究系统性红斑狼疮患者骨髓间充质干细胞(BM-MSC)的细胞形态、表面标志、细胞周期和生长曲线等生物学特性及其造血细胞因子IL-7、IL-11、SCF和GM-CSF的mRNA表达水平。通过与正常BM-MSC进行对比,试图探讨SLE患者BM-MSC有无异常,BM-MSC在SLE发病机制中可能的作用以及BM-MSC在骨髓干细胞移植中的作用。
方法密度梯度离心法和贴壁筛选法相结合,用密度为1.073g/ml的Percoll分离液分离出BM-MSC,用含10%胎牛血清的L-DMEM完全培养液在体外培养扩增。在倒置显微镜下观察原代细胞及传代细胞的形态,密度,生长情况。用MTT法绘制BM-MSC的生长曲线。通过流式细胞仪分析BM-MSC的细胞周期和表面标志,如CD14,CD29,CD34,CD44,CD45,CD105,HLA-DR。采用RT-PCR的方法在mRNA的水平上分析正常BM-MSC和SLE患者BM-MSC中造血细胞因子IL-7,SCF,IL-11和GM-CSF的表达水平。
结果正常和SLE患者BM-MSC原代及传代的细胞在细胞形态学上无明显差别。两者BM-MSC细胞表面CD29,CD34,CD105表达均为阳性,CD14,CD34,CD45表达均为阴性。HLA-DR的表达水平在不同供者BM-MSC中有所差异,而与是否为SLE患者BM-MSC无相关性。SLE患者BM-MSC在体外培养增殖分化活跃,与正常BM-MSC相比有极显著的差别。SLE患者BM-MSC处于G2-M期的细胞为11.74%,处于S期的细胞为7%,与正常BM-MSC(G2-M期的细胞为2.39%,处于S期的细胞为4.39%)相比有显著增加。正常BM-MSC和SLE患者BM-MSC细胞内均表达IL-7mRNA和SCFmRNA,SCFmRNA的表达量两者无明显差异,正常BM-MSC细胞内IL-7mRNA的表达量约为SLE患者BM-MSC细胞的两倍。正常BM-MSC和SLE患者BM-MSC均不表达IL-11mRNA。只有SLE患者BM-MSC表达GM-CSFmRNA。
讨论正常BM-MSC和SLE患者BM-MSC原代和传代细胞在细胞形态和细胞表面标志(CD分子)上无明显差异。SLE患者BM-MSC表现出非常活跃的增殖和分化。正常BM-MSC细胞内IL-7mRNA的表达量约为SLE患者BM-MSC细胞的两倍。正常BM-MSC和SLE患者BM-MSCSCFmRNA的表达量两者无明显差异。只有SLE患者BM-MSC表达GM-CSFmRNA。