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研究背景亚临床甲状腺功能减退症(Subclinical hypothyroidism, SCH)(简称亚临床甲减)是指血清促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone, TSH)水平增高,而血清游离甲状腺素(free thyroxine, FT4)正常的一种病理状态。大多数专家认同亚临床甲减系早期的、轻度的甲状腺功能减退。根据血清TSH水平,亚临床甲减可分为轻度亚临床甲减(TSH浓度介于4.5～10 mU/L)和重度亚临床甲减(TSH≥10mU/L)。在一些前瞻性的队列研究中报道亚临床甲减与心血管疾病发病率及死亡率增加密切相关,这些可能与在亚临床甲减患者中存在的致动脉粥样硬化血脂谱有关；有系列报道在亚临床甲减患者中总胆固醇(total cholesterol, TC)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、甘油三酯水平升高,而高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol, HDL-C)水平降低。然而,尽管在亚临床甲减患者中可能存在上述脂质异常,但这也许并不能全部解释亚临床甲减患者中动脉粥样硬化和心血管疾病发病率的增加,可能还有其它致病因素的参与。在亚临床甲减患者中脂质谱的改变往往导致低密度脂蛋白(low-density lipoprotein, LDL)氧化易感性的改变；众所周知,氧化型LDL在动脉粥样硬化的发病中有着重要作用。Diekman等报道在甲减患者中由于缺少甲状腺素(T4)的抗氧化保护,循环中的LDL易于发生过氧化；然而,在亚临床甲减患者中关于LDL的氧化易感性改变相关研究和报道较少。LDL氧化是一系列复杂的过程,牵涉较多的氧化通路,其中一重要的途径是通过脂氧合酶(lipoxygenase, LOX)通路发生氧化,产生过氧羟基廿碳四烯酸(hydroperoxyeicosatetraenoic acid, HPETE)和过氧羟基十八碳二烯酸(hydroperoxyoctadecadienoic acid, HPODE)。这些HPETE和HPODE随之被还原为对应的羟基衍生物羟基廿碳四烯酸(hydroxy-eicosatetraenoic acid, HETE)和羟基十八碳二烯酸(hydroxy-octadecadienoic acid, HODE);在LDL中亚油酸(linoleic acid, LA)和花生四烯酸(arachidonic acid, AA)的氧化对应着各自形成HODE和HETE。这些HETE和HODE在动脉粥样硬化的形成中发挥着重要的作用。现有的脂质过氧化研究以针对花生四烯酸居多,关于亚油酸氧化的研究和报道相对较少,尽管亚油酸为LDL中最主要的多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acid, PUFA)。除了对LDL的研究外,Rago等用UPLC-MS/MS方法检测了一组冠心病患者和正常对照血浆中的18个主要类花生酸类产物,结果发现在冠心病患者血浆中9-HODE、3-HODE、8-HETE和白三烯B4 (LTB4)的水平反而较正常对照组明显降低,可能为心脏病严重程度的负性标志物。目前关于亚临床甲减患者LDL或血浆中亚油酸和花生四烯酸氧化应激产物——HODE、HETE水平的变化及其与亚临床甲减病情及动脉粥样硬化轻重程度的关系尚未见有文献报道。目的：考虑到亚临床甲减可增加动脉粥样硬化和心血管病的发病风险,并且脂质过氧化产物(主要是HETE和HODE)可能在动脉粥样硬化的发病中有着重要的作用,因此本研究拟：1、比较轻、重度亚临床甲减患者与正常对照组血浆和LDL中脂质过氧化产物——HODE和HETE表达水平的差异,以评价亚临床甲减患者氧化应激状况；2、探讨脂质过氧化、TSH水平和亚临床动脉粥样硬化指标——颈动脉内中膜厚度(intima-media thickness,IMT)三者之间的潜在联系,了解亚临床甲减患者动脉粥样硬化发病风险增加的潜在机制；3、比较血浆与LDL中HODEs、HETEs表达水平的差异,了解其在反映动脉硬化程度敏感性和特异性上的差异,力图寻找一个比IMT更佳的替代标志物来反映动脉粥样硬化。研究对象：亚临床甲减的诊断标准基于血清TSH水平高于正常值上限,而血清FT4正常；根据TSH升高的程度，,亚临床甲减患者进一步分为轻度(TSH水平介于4.5-10 mU/L)和重度(TSH≥10mU/L)。研究对象来自山东省宁阳县2013年1月至2013年2月流调人群(n=1331),严格按照既定的入选标准和排除标准,有160名患者初步诊断为亚临床甲减,半年后复查甲状腺功能以排除实验室误差及TSH的暂时性升高等,有129名患者二次检测结果均符合亚临床甲减的诊断并最终诊断为亚临床甲减,在这些患者中应用随机数字表法最终随机挑选10例轻度亚临床甲减患者及10例年龄、性别匹配的重度亚临床甲减患者；正常对照组选自同一流调人群,严格按照排除标准经病史询问、体格检查、心电图和常规实验室检查等排除患任何疾病,亦间隔半年重复测量二次甲状腺功能均正常后初筛入选200名,采用随机数字表法选择10名作为正常对照组,年龄、性别均匹配。研究方法：1、收集每个研究对象基本临床资料；超声测量颈动脉内中膜厚度；留取血标本进行常规生化指标及甲状腺功能检测；留取部分血浆加入抗氧化剂2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)后-80℃冰箱冷冻保存,以备后续的LDL分离及质谱检测；2、快速蛋白液相色谱法(Fast Performance Liquid Chromatograhy, FPLC)分离血浆LDL：先收集FPLC各组分后应用血总胆固醇和甘油三酯试剂盒分别测定各组分总胆固醇和甘油三酯浓度,从而鉴定LDL峰所在位置,再定向收集LDL；用试剂盒测定LDL基本参数；3、摸索质谱条件,建立标准曲线,将血浆和LDL样品分别经前处理提取脂质后应用Thermo Vantage三重四极杆液质联用仪(LC-ESI-MS)分别检测血浆及LDL中脂质过氧化产物HODE和HETE的含量。统计分析：本实验采用SPSS 17.0统计软件进行统计学处理。计量资料均以x±s表示,多组比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA),组间差异采用Bonferroni法进行两两比较；方差不齐或非正态分布资料采用非参数检验(Kruskal-Wallis H检验)比较。P<0.05为差异有统计学意义。采用Spearman相关分析进行因素间的相关分析。结果：1、各组间临床基线资料的比较重度SCH组LDL-C和]nean-IMT水平较正常对照组显著升高(P<0.05),而在轻度SCH组LDL-C和mean-IMT水平与正常对照组比较均差异无统计学意义(P>0.05)；三组间年龄、性别、BMI、收缩压和舒张压、空腹血糖、TC、HDL-C和甘油三酯水平差异均无统计学意义(均P>0.05)。在LDL中,TC浓度在正常对照组、轻度SCH及重度SCH组中呈逐步升高趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)；TG浓度在三组比较差异无统计学意义(P>0.05)。2、TSH水平与mean-IMT的相关性分析在所有研究对象中,TSH水平与mean-IMT呈显著正相关(r=0.401,P=0.028)；即使在矫正年龄、性别、TC、HDL-C, LDL-C和TG后两者仍呈显著正相关(r=0.480,P=0.018),此结果在一定程度上揭示了亚临床甲减患者随着TSH水平升高,动脉粥样硬化发病风险显著增加。3、亚临床甲减患者脂质过氧化水平的比较无论是在血浆还是LDL中,重度SCH组9-HODE和13-HODE水平均显著高于正常对照组(P<0.05或<0.01),而轻度SCH组与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)；重度SCH组血浆9-HODE水平较轻度SCH组亦显著升高(P<0.01)。重度SCH组血浆5-HETE水平较正常对照组显著升高(P<0.05),而轻度SCH组与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)；血浆12-HETE的浓度,在轻度和重度SCH组均较正常对照组显著升高(分别P<0.05和0.01),而重度SCH组与轻度SCH组间比较差异无统计学意义。不同于血浆,在LDL中5-,12-和15-HETE水平在三组间比较差异均无统计学意义。4、LDL中HODE水平与TSH的相关性分析Spearm,an’s相关分析显示LDL中9-HODE和13-HODE水平均与TSH呈显著正相关(分别r=0.376、P=0.041,和r=0.447,P=0.013),提示随着TSH水平的升高LDL中脂质过氧化水平显著增加。5、血浆与LDL中HODEs及HETEs水平在反映动脉硬化程度上敏感性的比较把研究对象根据Inax-IMT水平分为正常组(max-IMT≤0.9mm,n=16)和内膜增厚组(max-IMT>0.9mm,n=14),在内膜增厚组LDL中,无论是9-HODE还是13-HODE水平均较正常组显著升高,P值分别为0.017和0.015。而血浆中9-HODE和13-HODE水平在内膜增厚组与正常组比较差异无统计学意义(均P>0.05)。对5-,12-,和15-HETE水平,无论是在血浆还是LDL中,在内膜增厚组与正常组比较差异均无统计学意义(均P>0.05)LDL中HODE水平与mean-IMT的Spearman’s相关分析提示,LDL中9-HODE和13-HODE水平均与mean-IMT呈显著正相关(r值分别为0.479、0.447,P值分别为0.007、0.013),而HETE水平与nean-IMT不相关。结论：1、亚临床甲减患者随着TSH水平的增加,出现了血脂、脂质过氧化水平及动脉粥样硬化严重程度的显著增加,验证了亚临床甲减、脂质过氧化及动脉粥样硬化之间的密切联系；2、血LDL中的9-HODE和13-HODE水平是较HETEs及血浆中相关指标在反映动脉硬化程度上更敏感的指标；3、本研究提示有必要对重度亚临床甲减患者进行替代干预治疗,以减轻脂质过氧化及动脉粥样硬化的进展。