目的 大量临床和实验研究均已证明纳洛酮在心肌缺血再灌注损伤中对心肌有保护作用，可以改善心肌能量代谢，稳定溶酶体膜，抑制中性粒细胞释放超氧阴离子、抗心律失常等，但对细胞凋亡及炎性介质的影响未见报导。本研究从凋亡和坏死后炎症两个方面观察了纳洛酮对缺氧心肌细胞的保护作用。 方法 本研究分为两部分：细胞培养研究部分和动物实验部分。细胞培养研究：取乳兔心室肌细胞培养传一代后分成三组，每组至少3瓶细胞：正常对照组、缺氧组（单纯缺氧／复氧）、用药组（缺氧／复氧加纳洛酮干预，终浓度5uM），后两组又按不同缺氧／复氧时间分为后三个亚组：缺氧2小时组；缺氧2小时／复氧2小时组；缺氧2小时／复氧4小时组。然后用流式细胞仪检测缺氧／复氧后不同时间点的细胞线粒体膜电位变化及凋亡情况。另设缺氧2小时／复氧16小时组，用TUNEL法检测细胞凋亡。动物实验部分：22只新西兰大白兔随机分为缺血／再灌注组，8只，结扎冠状动脉左前降支1小时／开放4.5小时；治疗组，8只，结扎冠状动脉左前降1小时／开放4.5小时，于结扎同时静注纳洛酮，0.4mg／kg；假手术组，6只，手术过程同前，动脉穿线后不结扎。测缺血／再灌注组和治疗组再灌注4.5小时缺血区心肌IL-8含量；测各组动脉结扎前及再灌注4.5小时后的血清IL-8含量；测各组再灌注4.5小时后的血清6-Keto-PGF1a／TXB₂的含量。 结果 细胞培养部分：1．缺氧后，缺氧组、用药组的线粒体膜电位均低于对照组（P≤0.01）；用药组线粒体膜电位高于缺氧组（P≤0.01）。2．缺氧2小时内线粒体膜电位的下降幅度较小，大幅度的下降发生在复氧期。缺氧组的线粒体膜电位的大幅度下降发生在复氧头2小时内；用药组则发生在复氧2～4小时。3．复 秦宇红砚卜卜毕业论义 纳洛酮对缺氧心肌细胞保护作用的实验研究一中文摘要 氧4小时末，缺氧组的凋亡百分比明显高于对照组和用药组 呼＜0刀1八而用药组与对照组比较无明显差异。同样情况也见于 坏死比率。缺氧组内凋亡百分比明显高于坏死比率o叼刀5人4． 缺氧 2小时／复氧 16小时，缺氧组的细胞凋亡（T［JNEL法）百分 比同样明显多于对照组和用药组0＜O．01人动物实验部分：缺血 1小时／再灌注4．5小时毕，1．治疗组的缺血区心肌血流量明显 高于再灌注组0刃刀1入2．治疗组缺血区心肌组织IL—8含量 明显低于再灌注组；3．再灌注前，各组间血清IL—8含量无差异； 再灌注后，再灌注组IL一8含量明显升高o1．01人 且显著高 于治疗组和假手术组0刃刀1)：治疗组、假手术组再灌注前、后 无差异。4．再灌注后，再灌注组血清TXBZ含量明显高于假手术 组和治疗组（P＜0＊1）；6－Ket。－NFI旷＊＊＊ 比值则较后二者明 显降低（P＜0刀1）。 结论：1．缺氧／复氧可通过诱导家兔心室肌细胞线粒体膜电位 丧夫从而导至细胞凋亡和坏死；凋亡是缺氧／复氧早期细胞死亡的 主要表现形式。2．早期应用纳洛酮可明显延缓缺氧／复氧后线粒体 膜电位的下降，从而减少缺氧／复氧后细胞凋亡和坏死的发生。3． 纳洛酮可以降低家兔心肌缺血／再灌注后缺血区心肌及血清中炎 症介质的含量，降低局部炎症反应的程度。 因此纳洛酮可以通过抑制凋亡和坏死后炎症两个方面对缺 氧／复氧心肌细胞产生保护作用。