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目的:树突状细胞(dendritic cells,DC)、调节性T细胞(regulatory T cells.Tregs)是近年来发现的与免疫反应密切相关的细胞群。树突状细胞(dendritic cells,DC)是一组有树突状形态的抗原提呈细胞,为目前己知的功能最强的抗原提呈细(antigen present cell,APC),并且是唯一能激活初始免疫应答的APC。不同分化阶段的DC具有不同的免疫学特性。活化暨成熟阶段的DC摄取和加工抗原的能力减弱,而抗原递呈、激活T细胞能力逐渐增加,主要作用为免疫增强。Tregs细胞是T细胞的一个亚群,它能以“主动抑制”,和非抗原特异性的方式抑制CD4+、CD8+T细胞的增殖及功能活性,在维持免疫系统稳定、防止自身免疫性疾病方面具有重要作用。本研究旨在通过胸腺成熟DC和Tregs与重症肌无力(MG)发生的相关性的研究,探讨MG上游阶段的发病机理。
材料与方法:1)研究对象。(1)MG组,入选标准:①符合MG的诊断标准。②胸腺切除之前没有进行免疫抑制治疗。(2)正常对照组,为同期因心脏手术需行胸腺部分切除的患者。入选标准:①除心脏病之外不伴有与自身免疫相关的其他疾病。②近期无感染、未用免疫抑制剂。2)研究方法。(1)切除标本后立即入液氮速冻,后存.80℃冰箱备用。(2)用所存标本制备冰冻切片。(3)以高表达CD4+CD25+的细胞作为Tegs的鉴定标准,用间接免疫荧光法双标记方法显示Tregs在胸腺的表达情况。观察拍照记录,用图像分析软件Image pro-plus6.0计算相关阳性表达细胞的数量和比例。借助SPSS5.0采用卡方检验和T检验进行分析。(4)以高表达DC-LAMP+的细胞作为成熟的并指树突状细胞,采用免疫酶组织化学技术显示高表达DC-LAMP+的成熟并指树突状细胞在胸腺的表达情况。图像观察记录方法、统计处理同前。
结果:1)MG组,筛选出39人。正常对照组,筛选出19人。经卡方检验证实性别和年龄在两组中的分布无差异。2)观察发现:(1)MG组和正常对照组胸腺组织的Tregs均表达在胸腺髓质细胞区,这和以往的研究结果相一致。(2)胸腺生发中心的细胞高表达CD25,但CD4表达较弱。表明生发中心多数为B细胞集合,与先前的研究结果一致。(3)正常对照组成熟DC严格地限定在胸腺髓质区;而MG组尤其出现明显生发中心者,成熟树突状细胞分布不规则,在髓质、皮质和间质均能见到。(4)正常对照组成熟DC大致呈均匀分布在髓质区,而:MG组则较多地见到成簇分布,尤其在生发中心周围往往出现成熟树DC密集包绕表现。3)应用图像辅助分析软件Image pro-plus6.0计算的阳性细胞数经SPSS15.0做两独立样本均数的T检验。结果显示对于Tregs而言,平均视野绝对细胞数两组差异没有统计学意义(P>0.05),平均视野相对细胞数(阳性细胞面积/阳性表达区有核细胞面积)正常对照组高于MG组(P<0.05)。对于成熟DC,阳性区平均视野相对细胞数和绝对数MG组均高于在正常组。
结论:1)MG患者胸腺组织存在Tregs数量比例的减少,因该种细胞的减少引发的免疫调节及抑制功能的下降可能是MG的始动因素。2)MG患者胸腺组织存在成熟。DC数量比例的增多,以及分布的异常。这种异常提示成熟树突状细胞积极地参与了MG的发病过程,树突状细胞本身状态的异常有可能是MG起病的始动因素之一。