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本研究在已成功地克隆和高效表达人FL重组蛋白的工作基础上,展开了以下几方面的实验研究:建立rhFL的分离纯化工艺,获得足够量的、高纯度且具有生物学活性的重组FL蛋白;采用亚致死剂量6.0Gy60Coγ照射BALB/C小鼠造成急性辐射损伤,在辐射前、后用FL、G-CSF、EPO、IL-11等单独或联合进行救治,观察外周血细胞、骨髓细胞集落培养CFU-MIX计数及生存期的改变;同时做光镜切片,观察小鼠各脏器的形态学改变,从而分析这些细胞因子对急性辐射损伤小鼠骨髓造血功能的恢复,各脏器的辐射防护效应及生存期的改变,为临床放、化疗病人的治疗提供理论依据和实验参数;rhFL对造血系统恶性肿瘤细胞株细胞(Raji)的体外作用研究,为FL在临床中的应用提供有价值的资料。
研究结果表明:采用全自动发酵装置,获得毕氏酵母高效表达rhFL,再经DEAE离子柱、凝胶过滤柱SUPERDEXtm-200prepgrade和FPLC分离系统进行分离纯化,最终获得较高纯度的重组蛋白,经Raji细胞对FL的增殖实验和造血细胞体外集落形成实验分析,证明所得的重组蛋白有良好的生物学活性;FL、G-CSF、EPO、IL-11单独或联合处理可明显增加受辐照小鼠的骨髓细胞、外周血WBC、PLT、RBC和CFU-MIX的数量,与对照组相比均有显著性差异。切片观察,重组FL对小鼠的肝、心、肺、肾有明显治疗作用,与对照组相比,能明显提高实验组小鼠的生存率,提示FL等细胞因子对受辐照小鼠的骨髓造血功能具有明显生物学效应,动物模型中获得的数据可作为临床运用的参照,同时也为肿瘤病人的放、化疗提供新的思路。