邻苯二甲酸酯及其代谢物在猪体内的分布特征及膳食风险评估

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邻苯二甲酸酯(Phthalate esters,PAEs)是一类工业生产中最常用的塑化剂,极易从塑料迁移,在生物体中累积或迅速代谢为邻苯二甲酸单酯(monoalkyl phthalate esters,MPEs)。作为环境激素,PAEs对人体存在内分泌干扰毒性,同时对生物体具有神经毒性和致癌致畸致突变作用。MPEs作为PAEs的代谢物具有更强的生物活性,对生物的毒性更大。各个国家和国际组织相继出台了一系列限制PAEs使用的标准及法规,建立了PAEs在食品中的检测方法,并规定了部分PAEs的限量,但是对PAEs及其代谢物MPEs在动物源食品中,尤其是肉类及内脏中的检测方法研究却鲜有报道。因此,探究动物源食品中PAEs及其代谢产物MPEs的检测方法及膳食风险评估具有重要意义。随居民消费水平的提高,我国猪肉及特色内脏食品的消费量日益增多,我国已成为猪肉及其内脏消费的第一大国。然而,目前对猪组织中PAEs的关注仅限于优先控制的6种PAEs,而对非优先控制的PAEs及代谢物MPEs的研究很少。针对这一问题,本研究在已有国标方法和研究室方法的基础上进行优化,建立了猪肉及内脏中22种PAEs的固相萃取-气相色谱-串联质谱(SPE-GC-MS/MS)的分析方法,及8种MPEs在猪肉及内脏中的固相萃取-液相色谱-串联质谱(SPE-LC-MS/MS)分析方法。在方法建立的基础上,本研究对规模化养殖厂中猪的6种组织(心、肝、脾、肺、肾和肉)中PAEs和MPEs的污染水平、分布特征及相关性进行了研究。同时,调查了北京市市售猪肉及肝肾等脏器中PAEs的污染水平,并开展了膳食摄入风险评估。研究结果表明:(1)采用2次乙腈,超声提取后经PSA/silica玻璃固相萃取柱净化,在猪肝中添加3个不同浓度(10、50、100 ng/g)的PAEs的回收率为80%-114%,RSD均小于等于4.9%,猪组织中22种PAEs的定量限(LOQs)和检出限(LODs)分别为0.32-12.0 ng/g和0.097-3.61 ng/g,所建立的SPE-GC-MS/MS方法能够实现该类样品中22种PAEs的痕量分析;建立了β-glucuronidase酶解和MAX固相萃取小柱净化相结合的前处理方法,采用五氟苯基(PFP)色谱柱,0.1%甲酸乙腈和0.1%甲酸水作为流动相,在3个不同浓度的添加水平(10、25、100ng/g)回收率为64.9%-106.7%,相对标准偏差均小于等于7.4%,猪组织中8种MPEs的定量限(LOQs)和检出限(LODs)分别为0.2-1.9 ng/g和0.01-0.6 ng/g,所建立的SPE-LC-MS/MS方法解决了猪组织样品中8种MPEs的痕量分析。(2)在规模化养殖厂的所有猪组织样品中共有8种PAEs和5种MPEs被检出。其中猪肝中的DEHP与其二级代谢物MEOHP、DBP与其代谢物MBP的检出浓度均呈极显著正相关(p<0.01),DEP与其代谢物MEP的检出浓度呈显著正向关(p<0.05);猪肉中,DMP与其代谢物MMP、DEP与其代谢物MEP、DBP与其代谢物MBP和DEHP与其代谢物MEHP均呈显著正相关(p<0.05);其他组织中,除心脏中DEHP与其代谢物MEHP呈显著正向关外,检出的PAEs与其对应的MPEs均存在一定相关性,但相关性不显著。(3)北京市售猪肉及肝肾中均存在一定的邻苯二甲酸酯污染,以邻苯二甲酸二甲酯(DMP)、邻苯二甲酸二丁酯(DBP)、邻苯二甲酸二乙酯(DEP)为主,其中猪肝中DMP的最高浓度达1521.3 ng/g,猪肾中DMP最高浓度达1479.6 ng/g,猪肉中DBP的最高浓度达1330.7 ng/g,非优先控制的邻苯二甲酸二异丁酯(DIBP)和邻苯二甲酸二庚酯(DHP)在猪肉中浓度水平较高,最高检出浓度分别为927.4 ng/g和1517.9 ng/g。对4种毒理学数据明确的PAEs进行非致癌风险评估,所有样品中危险商值均小于2.66×10–2,同时对DEHP进行了致癌风险评估,所有样品中的过量癌症风险指数均小于5.00×10–5。由此可见,本研究建立了猪组织中22种PAEs及8种MPEs的分析方法,在高中低3个浓度添加水平获得回收率,精确度和灵敏度较高,实现了PAEs和MPEs的同时测定。在此基础上开展了猪组织中PAEs和MPEs浓度水平的相关性分析,发现在猪肝和猪肉中,MPEs可作为PAEs的定性指示物;通过调查分析,发现北京市市售猪肉及肝肾中存在一定的PAEs及MPEs污染,其膳食暴露水平仍在可接受范围内,但是由于代谢产物MPEs毒理数据不明确,尚未有建立的模型将MPEs转化为PAEs,因此,PAEs的风险仍不可忽视。
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